本文是一篇医学论文，笔者经过研究，得出结论：我国禽星状病毒分布广泛，其个体阳性率为 1.4%，群体阳性率为 62.5%，且在养殖、屠宰和销售的每个环节中均存在禽星状病毒感染。
1 前 言
1.1 病原学
1.1.1 病毒分类
根据病毒感染的宿主不同，国际病毒分类委员会（International committee ontaxonomy of viruses，ICTV）将星状病毒科划分为 2 个病毒属，即哺乳动物星状病毒属（Mamastrovirus）和禽星状病毒属（Avastrovirus）(Xue et al., 2020)。其中，禽星状病毒属可分为 3 个种，分别为 Avastrovirus 1（AAstV-1）、Avastrovirus 2（AAstV-2）和 Avastrovirus 3 （ AAstV-3 ） (Fernandez-Correa et al., 2019; Jiang et al., 1993;Palomino-Tapia et al., 2020)，见表 1 所示。此外，还有一些未经分类的禽星状病毒，比如从鸭中分离出的多种病毒包括鸭肝炎病毒 3（DHV-3 / DAstV-2）(Todd et al.,2009)，DHV-3 / DAstV-2-like，DAstV-CPH（DAstV-3）等。
表 1 国际病毒分类委员会正式批准的禽星状病毒列表（2019）
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1.2 流行病学
禽星状病毒在世界范围内感染普遍，宿主范围广泛，大多数禽类都表现为易感。病毒可通过粪口途径传播，也可以通过星状病毒污染的食物、水源或者工具进行水平传播，而病毒从卵到子代也可以发生垂直传播，除此之外，黑甲虫也是 CAstV 的载体。禽星状病毒还可以在种间进行传播。在鸭胚和鹅胚中可分离到禽肾炎病毒和TAstV-1，禽星状病毒在火鸡、珍珠鸡、鸭和水貂之间也可发生种间传播(Bidin et al.,2012; Fu et al., 2009; Sun et al., 2014)。此外，有研究显示，从冈比亚的一名儿童身上分离到一株病毒，该毒株与在火鸡和鸡群中检测到的 ANV-1 相似，从另一名儿童身上分离到一株与鸡群中检到的 ANV-2 相似的毒株(Meyer et al., 2015)。也有研究对从事家禽相关工作的人员进行了禽星状病毒血清学检测，结果显示，有多达 26%的人员为 TAstV-2 血清抗体阳性(Meliopoulos et al., 2014)，这表明人类有被禽星状病毒感染的危险。
鸭星状病毒（DAstV）是最早被发现的禽星状病毒。早在 1965 年，Asplin 等人就报道了疑似鸭星状病毒感染而引起的病毒性肝炎(Asplin, 1965a)。受到研究条件的限制，并未作出准确的判断，直到 1985 年，Gough 等人才做出准确的判断，确定该病毒为鸭肝炎病毒 2 型(Gough et al., 1985)，即鸭星状病毒 1 型。1983-1984 年间，DAstV-1 引发的病毒性肝炎在英国 3 个农场再次发生(Gough et al., 1985; Gough et al.,1984)。在 1969 年研究者发现了鸭肝炎病毒 3 型，并在 2009 年将该毒株重新命名为鸭星状病毒 2 型(王晓冰等, 2018)。而在 1975 年，该病例再次发生(Haider et al., 1979)。Liu 等人在 2013 年从刚出壳的雏鸭体内检测到鸭星状病毒 CPH 株，并在来自种蛋、雏鸭和成年鸭等样品中发现了该病毒株，这表明这种病毒株可以通过水平和垂直传播两种途径传播(刘宁等, 2017)。2018 年，Fu、Chen 等分别从我国一处病鸭场中分离到鸭星状病毒 1 型(Fu et al., 2009; Chen et al., 2012)。Liao 等在 2011 年北京鸭粪便和肠道样本中发现了鸭星状病毒(Liao et al., 2015)。2012 年至 2014 年，Liu 等从发病的樱桃谷鸭和雏鸭中分离到 2 型和 3 型鸭星状病毒(Liu et al., 2014; Liu et al., 2014)。之后在我国一家养鸭场中发现了鸭星状病毒 CPH 株（DAstV/CPH）(Liu et al., 2014)，在北京鸭、绍兴鸭和兰德斯鸭体内(Liao et al., 2015)也发现了类似的病毒株。现在鸭星状病毒 CPH 株已经在中国多个省份被发现(Liu et al., 2014)，并且大多数DAstV/CPH 是从健康的大日龄或成年鸭体内发现的，这些鸭子可能作为病毒的隐性携带者，将病毒通过粪便等进行水平传播(Liao et al., 2015; Liu et al., 2014)。
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2 材料方法
2.1 材料
2.1.1 样品来源
本研究从山东、江苏、福建、四川、黑龙江、广东、广西、河南共 8 个省份，随机选择零售市场、批发市场、养殖场和屠宰场等 32 个场点，共采集来自鸡、鸭、鹅、和鸽子源的样品 1210 份，其中拭子样品 1160 份，组织样品 50 份，详见表 2 所示。拭子样品放入含 1 mL PBS（含有 100 U/mL 青霉素和 10 mg/mL 链霉素）的离心管中，组织样品放入塑封袋，低温运输。
表 2 所采集样品的背景信息
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2.2 方法
2.2.1 禽星状病毒的分子流行病学调查
2.2.1.1 样品处理
将装有拭子样品的离心管震荡混匀，10000 r/min 离心 5 min，取 200 μL 上清液用于核酸提取；取适量组织样品研磨，加入 1 mL PBS 缓冲液（含有 100 U/mL 青霉素和 10 mg/mL 链霉素），10000 r/min 离心 5 min，取 200 μL 上清液用于核酸提取。
2.2.1.2 核酸提取
按照高通量核酸提取工作站操作说明，进行核酸提取，具体步骤如下：
（1）将样品震荡混匀，10000 r/min 离心 5 min，取 200 μL 样品按照顺序加入到加样槽中，封口并做好标记。
（2）分别在试剂槽中加入相应的试剂，详见表 4 所示。
（3）打开电脑软件和核酸提取仪，对照软件中提示将胶垫、扑捉板、试剂、枪头、加样槽、吸附柱和核酸收集板摆放到相应的位置。
（4）选择所有枪头为可用状态，确认仪器状态及试剂耗材正确后，按照提示在相应栏打对勾确认开始。
（5）再机器运行后的 45-50 min，检查吸附柱是否堵塞，若发生堵塞，则需要将吸附柱膜刺破。
（6）待机器运行完毕，将核酸收集板加盖标记，放于 4 ℃暂存或-80 ℃保存。
（7）按照要求清洗仪器，并紫外灯照射 15 min，同时弃掉废液槽中的废液。
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3 结果..................................................25
3.1 禽星状病毒的分子流行病学调查................................25
3.1.1 禽星状病毒流行病学调查结果...............................................25
3.1.2 基于 RdRp 序列的遗传进化分析......................................... 26
4 讨论.....................................43
5 结论.................................................47
4 讨论
4.1 禽星状病毒的分子流行病学调查
本研究从我国 8 个省份的养殖场、批发市场、零售市场和屠宰场采集了共 1210份样品，包括咽拭子和泄殖腔拭子，经提取核酸后使用 RT-PCR 检测，结果显示，1210 份样品中检测到 CAstV、DAstV-2、DAstV-1、GoAstV、AAstV-3 和 ANV 等共17 株禽星状病毒，这表明在我国流行的禽星状病毒种类较多。分析样品来源发现，17 株禽星状病毒株分布于 5 个省份，这显示禽星状病毒在我国流行范围比较广。其中，山东和江苏两个省份的样品中检测到共 13 株禽星状病毒，这与 2017 年爆发的鹅痛风病(Zhang et al., 2018)的流行范围也基本一致。
从分离株宿主来源可以发现，17 株禽星状病毒全部为鸡源或鸭源，这表明在我国，鸡和鸭是禽星状病毒的主要宿主。而 CAstV 和 ANV 只来源于鸡，但是鸭源样品中分离到了 DAstV-2、DAstV-1 和 GoAstV，而 Bidin 等从鸭胚中检测到 ANV 和TAstV-1(Bidin et al., 2012)，说明鸡是鸡星状病毒和禽肾炎病毒的宿主，而鸭可以作为鸭星状病毒和鹅星状病毒等多种禽星状病毒的宿主。发现的 2 株鹅星状病毒可以在鸭胚中进行增殖，说明鹅星状病毒可以跨宿主传播，这与 Wei 等结果一致(Wei et al.,2020)。此外，我们发现从养殖、屠宰到批发和零售每个环节中均检测到有禽星状病毒，说明整个家禽全产业链中都已经被禽星状病毒污染，这提醒我们要对每个环节加强监控力度，同时也从侧面反映禽星状病毒在国内并没有受到足够的重视。从山东采集的 50 份样品中检测到了鸭源新型鹅星状病毒、鸡星状病毒和鸭星状病毒，并且在养殖场鹅屠宰场中均检测到病毒，说明山东地区禽星状病毒的流行情况较为复杂，污染情况较为严重。江苏样品中只检测到了鸡星状病毒和禽肾炎病毒，未检测到其他类型的禽星状病毒，说明江苏地区鸡星状病毒和禽肾炎病毒流行情况较为严重，而其他类型禽星状病毒流行情况不明。从广东鸭源样品中检测到 1 株新型禽星状病毒，经序列比对发现，该毒株 RdRp 部分序列和 ORF2 序列与香港分离株MPJ1433 和 MPJ1442 同源性(Chu et al., 2012)最高，该病毒属于 AAstV-3，目前尚未确定具体的分型，这提示我们可能还有许多新型禽星状病毒尚未被发现。
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5 结论
1.我国禽星状病毒分布广泛，其个体阳性率为 1.4%，群体阳性率为 62.5%，且在养殖、屠宰和销售的每个环节中均存在禽星状病毒感染。
2.在鸭源样品中分离鉴定到新型鹅星状病毒，表明新型鹅星状病毒可以跨宿主传播。
3. 通过对禽星状病毒的生物学特性分析，发现我国禽星状病毒存在遗传多样性。
参考文献（略）