第一部分：七氣醚对离体重度子痫前期胎盘以及外周血中sEng蛋白表达的影响
前言
研究现状和成果
子痫前期(pre-eclampsia)是好娠期特有的严重的产科并发症，主要临床表现为好娠20周以后出现的高血压和蛋白尿。全球范围内约有5%的好娠期妇女发生子痫前期，是导致孕妇、胎儿和新生儿死亡的主要原因。重度子痫前期是子痫前期加重恶化阶段，除了重度高血压或者严重蛋白尿以外，并伴有多器官功能障碍。因此，重度子痫前期的患者一旦孕周达到32-34周，往往需要终止好娘来挽救患者生命。目前，子痫前期的病因和发病机制尚未清绝，而血管重塑过程的破坏和全身性的抗血管形成反应目前被认为是该疾病的主要发病机制。一些研究证实血液中中血管生成因子成分的改变和血管重塑障碍密切相关，这些血管生成因子包括促血管生成因子（PIGF)和抗血管生成因子（sEng)和（中文名字呢）sFltl等，两者平衡的协调在子痫前期和重度子痫前期的疾病进展中至关重要。Endognn(简写为Eng)，是分子质量180 kd的同型二聚体膜糖蛋白，主要表达于内皮细胞表面和胎盘合体滋养层细胞表面。人类Eng编码基因定位于染色体9q34。研究表明,Eng是转化生长因子P(TGF-P)受体复合物成分之一，基因结构与TGF-P受体(TGF-PR)III高度同源，可特异性结合TGF-pi和TGF-p3，调节细胞对TGF-P的生物学效应。因此，Eng在血管生成中是必需的，其功能与TGF-P及其受体密切相关，可溶性endoglin (sEng)为Endoglin的可溶性形式，是其氣基末端裂解重组的截短形式，来源于胎盘，通过阻碍TFG-P和其受体的结合，抑制TFG-P信号和eNOS的活化，且碍血管发育和重塑。sEng在子痫前期患者的血清中表达上调，分娩后降低，与疾病的严重程度呈正相关[5]。
据研究表明，子痫前期出现临床症状之前，胎盘形态和功能的改变就已经发生；重症子痫前期患者在胎盘挽出后，临床症状会自然消退；而在好摄滋养细胞疾病患者中,往往也会出现子病前期的症状，这都说明胎盘在重症子痫前期发病中起重要作用。因此，研究胎盘是实现早期诊断的关键环节，但胎盘组织是在分挽之后才能得到的，分娩前只能对其进行影像学分析，影像学指标的测定受很多因素的影响，对临床诊断和治疗带来一定的难度。我们想到胎盘中的蛋白质必然会通过相应的途径释放至清,不仅其在血清中的浓度发生变化，同时也会引起其他一些相关蛋白质发生相应变化。七氟醚是一种应用于产科麻醉吸入麻醉药。其具有血气分配系数小、快速诱导和苏醒的优点，能迅速从孕妇和新生儿体内清除，对新生儿Apgar评分和將带血气无明显影响[7]。我们通过七氟醚干预重度子痫前期胎盘组织，观察对sEng蛋白的表达有无改善作用。在本实验中，我们使用3%七氟醚（1MAC)干预重症子痫前期胎盘组织24h,通过检测七氟醚干预前后的sEng蛋白表达的变化，探讨吸入七截醚对重度子痫前期患者胎盘sEng蛋白表达的影响，为子痫前期的治疗及麻醉方案提供一个新的方法和思路。
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研究目的、方法
1、 综上，本研究根据国内外现有的研究基础，本研究进一步通过酵联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay ELISA)的方法检测了重症子痫前期患者外周血清和脐血血清中的相关蛋白的水平以及胎盘组织中该蛋白的表达水平。进一步证实了相关蛋白在重症子痫前期患者胎盘中表达水平改变，从而能为子痫前期的早期诊断和免疫治疗开辟新的路径。
2、 本实验还通过免疫印迹方法（western blot WB)的方法检测重症子痫前期产妇的胎盘组织中分离的滋养层细胞经七氟醚干预后相关蛋白的水平的变化，研究七氣醚对重症子痫前期产妇胎盘滋养层细胞的作用，研究该疾病的发病机制，并为该疾病的预防和治疗发现一种新的理论依据。
材料和方法
1.试剂材料
1.1.实验仪器
超净工作台浙江医科大学净化设备厂
ThermoForma 培养箱美国 ThermoForaiaDK-8A型电热恒温水浴箱上海静宏实验设备有限公司
TH-3560高压灭菌锅台湾TSAOHSIN公司
微量移液器德国Eppendorf公司
-20°C低温冰箱美国Thermo公司
Fabius GS premium麻醉机德国德尔格公司
七氣醚蒸发罐德国德尔格公司
VAMOS麻醉气体监测仪德国德尔格公司
低温高速离心机德国Eppendorf公司
蛋白质电泳仪及电转槽美国BIO-RAD公司
制冰机SANYO公司
台式恒温磁力振荡器上海跃进医疗仪器厂
超纯净水仪Millipore公司液氮罐成都液氣容器厂
匀裝机 PolytronPT1600ELittauLuzem 公司
恒温干燥箱202-1-S上海跃进医疗器械厂
GS800光密度成像系统Bio-Rad公司
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第二部分：免疫印记法(WESTERN BLOT)检测离体........ 14
前言........ 14
材料和方法........ 16
结果........ 23
讨论........25
第二部分：免疫印记法(Western blot)检测离体重症子痫产妇胎盘组织中滋养层细胞的细胞骨架蛋白的表达
前言
一、子痫前期(Preeclampsia, PE)研究的现状
好娠期高血压疾病是好娠期特有的疾病，子痫前期属于好娠期高血压疾病，是导致孕产妇和围生儿死亡的主要原因，临床表现为高血压，蛋白尿以及胎儿生长受限等症状。但肖前子痫前期的病因及发病机制尚未完全明确，主要认为其发病可能与胎盘残着床、免疫因素、遗传因素、血管内皮损伤等有关[24]。与正常好娠时合体滋养细胞，直接进行营养和气体交换不同，子痫前期胎盘滋养细胞层发育不良，难以完成气体交换，从而导致胎盘缺血、缺氧，胎盘局部出现应激和免疫损伤造成血管内皮细胞的损伤，使机体内血管活性物质释放，血管癌挛性收缩，血压升高，导致疾病的发生。胎盘是子痫前期发生的始动因素，在临床症状出现之前，胎盘形态和功能已经发生改变了；重症子痫前期患者在胎盘娩出后，临床症状和体征绝大多数自然消退；此病还可以发生于其他妊娠滋养细胞疾病患者中。这都说明胎盘在重症子痫前期发病中起重要作用。因此，研究胎盘的变化是实现早期诊断的关键环节，但胎盘组织是在分挽之后才能得到的，因此只能对其进行影像学分析，由于影像学指标的测定受很多因素的影响，对临床诊断和治疗的帮助有限。然而，胎盘中的蛋白质必然会通过相应的途径释放至血清，不仅其在血清中的浓度发生变化，同时也会引起其他一些相关蛋白质表达发生相应变化。
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结论
有关细胞骨架蛋白-9的研究多集中于肺瘤领域，而在胎盘中的研究很少。本研究发现在对照组和早发型重度子痫前期组胎盘组织的绒毛滋养细胞中，细胞骨架-9蛋白呈阳性表达，可能与誠毛滋养细胞为上皮细胞有关。此外，重度子痫前期患者血中可溶性Endoglin的水平与正常对照组相比显著增高，表明血中可溶性Endoglin蛋白的水平对重度子痫前期的诊断有预测价值。综上所述，在正常对照组母胎界面的胎盘组织中，细胞骨架蛋白-9表达少，实验组增加。有研究显示细胞骨架蛋白-7可用于鉴定重症子线前期的滋养细胞，在对照组和重度子痫前期组胎盘母胎界面的誠毛滋养细胞中可见细胞角蛋白7呈强阳性表达。因此，研究细胞骨架蛋白相关分子在子痫前期好娠胎盘中的表达情况，可以为深入了解子痫前期的发病原因提供新的思路。
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参考文献（略）