第1章脂质磁性纳米粒的制备及理化性质研究
1.1实验设计
本研究首先釆用乳糖酸（LA)和硬脂胺（ODA)之间的化学耦合反应制备半孔糖-硬脂胺嫁接物（Gal-ODA)，釆用核磁共振氢谱（iHNMR)和傅里叶变换红外光谱（FTIR)对其化学结构进行确证；在此基轴上，以单甘脂为脂质材料，釆用水性溶刻#散法分别制备对肝脏具有被动耗向功能的脂质磁性纳来粒(SLN-USPIO)、主动觀向功能的脂质磁性纳米粒（Gal-SLN-USPIO/PEG)及双重乾向功能的脂质磁性纳米粒（Gal-SLN-USPIO )，采用微粒粒度及表面电位分析仪测定三种不同的脂质磁性纳米粒的粒径、表面电位及多分散指数；采用透射电镜(TEM)观察脂质磁性纳米粒的形态、大小及分布等；利用外加强磁场来考察脂质纳米粒包裹磁性Fe304纳米颗粒的情况。
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1.2实验方法
1.2.1硬脂胺-半乳糖嫁接物（Gal-ODA)的合成及结构分析
精密称取硬脂胺0.5g,乳糖酸Ig,碳二亚胺1.76 g (EDC, 18.4 mmol)溶于50 ml无水乙醇中，在室温下撥拌反应72h后，加水沉淀产物，离心分离后所得沉淀经干燥后，得Gal-ODA嫁接物，其结构通过红外光谱（FTIR)和氢谱核磁共振('H NMR )进行确证。
1.2.2肝被动乾向脂质磁性纳米粒（SLN-USPIO)的制备
本实验参照Hu等人[42，43]制备園体脂质纳米粒的水性溶别扩散法制备SLN-USPIO。将1 ml油溶性的Fe304 (粒径为5 run,浓度为5 mg/ml)为核心的磁性纳米粒溶液超声分散于47 ml的F-68溶液（Poloxamer 188，0.1%，w/v)中，探头持续超声30 min ( 600 W，工作2s,间歇3s)后，加入10 mg/ml的油酸乙醇溶液1 ml,探头超声5 min,以得到FegClt纳米粒分散液。精密秤取35 mg单甘脂溶于2 ml无水乙醇中，水洛7(rc加热使其完全融解；在水浴7(rc的超声条件下，将脂质的乙醇溶液快速注入到Fe304纳米粒分散液中，持续超声5min后，最终得到肝被动乾向脂质磁性纳米粒SLN-USPIO。
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第2章脂质磁性纳米粒的体外细胞实验及在体正常肝组织乾向性研究
2.1实验设计
以小鼠单核/巨嘆细胞RAW264.7为被动乾向细胞模型，人正常肝细胞L02为主动觀向细胞模型和人肝癌细胞HepG2为疾病细胞模型，以异琉氣酸焚光素(FITC)分别对三种脂质磁性纳米粒进行焚光标记，釆用激光共聚焦显微镜定性研究和流式细胞计数仪定量研究考察三种细胞对不同的脂质磁性纳米粒的摄取能力；建立L02和HepG2两种细胞的共孵育体系，来检测两种细胞对不同脂质磁性纳米粒的竞争性摄取情况，以SLN-USPIO和Gal-SLN-USPIO/PEG为对照，进一步考察Gal-SLN-USPIO对人正常肝细胞及人肝癌细胞的鞔向性摄取能力；采用四甲基偶氮唾盐微量酶反应比色法（MTT Assay)对模型细胞摄取脂质磁性纳米粒后的细胞存活率进行检测，以考察本实验所制备的脂质磁性纳米粒对体外细胞的毒性情况；利用脂溶性染料DiR作为焚光分子探针，采用小动物活体焚光成像仪考察不同脂质磁性纳米粒在正常裸氣肝脏内不同时间点的乾向分布情况。
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2.2细胞系
人正常肝细胞系L02 (human normal liver cell line,由浙江大学医学院附属第一医院肝胆外科胡霄博士惠赠)；人肝细胞癌细胞系HepG2 (human hepatoma cellline)和鼠单核/巨唾细胞系RAW264.7 (murine macrophage cell line)由浙江大学药学院药物制备研究所提供。
23实验动物
正常BALB/C+nu/Fl裸鼠15只，雌雄不限，体重18-20g,由上海斯莱克实验动物责任有限公司提供。动物飼养、管理与实验严格按照浙江大学医学院动物实验管理规范要求进行。动物的饲养条件为温度25°C,湿度50-60%，昼夜12h交替光照，动物饲料为经湿热灭菌处理后的鼠粮，自由进食，饮用水为去离子水。
2.4实验方法
2.4.1细胞培养
分别取人正常肝细胞L02，人肝癌细胞HepG2和鼠单核/巨唾细胞RAW264.7，在含有10%(v/v)胎牛血清的DMEM高糖培养基（含青霉素、链霉素各lOOU/ml)中连续培养，并置于37°C培养箱中，孵育条件为5%C02,相对湿度90%。隔天换一次培养液，并用常规的姨酶/EDTA消化传代。
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第3章脂质磁性纳米粒的体外细胞MR成像研究......... 34
3.1实验设计......... 34
3.2试剂与仪器......... 34
3.3实验方法......... 35
3.3.1脂质磁性纳米粒样品MR扫描......... 35
3.3.2脂质磁性纳米粒的细胞摄取MR成像研究......... 35
3.4实验结果与讨论......... 35
3.5小结 .........38
第4章脂质磁性纳米粒的体内MR分子成像研究.........39
4.1实验设计......... 39
4.2试剂与仪器......... 39
4.3实验动物......... 40
4.4实验方法......... 40
4.5实验结果与讨论......... 42
4.6小结 ......... 48
第4章脂质磁性纳米粒的体内MR分子成像研究
4.1实验设计
因细胞学实验为体外实验研究，无生物体内的体液环境，因此无法准确评估分子探针应用于活体内的觀向效果。因此，本研究进行了在体MR分子成像实验，以进一步验证该分子探针的在体祀向性效果。采用肝癌组织块原位移植法构建HepG2裸鼠原位移植肝癌模型；对肿瘤模型进行分组，每组分别注射三种脂质磁性纳米粒后，采用小动物线圈经3.0T磁共振扫描仪扫描获得每组不同时间点的横断位T2WI图像；测量增强前及增强后不同时间点每组的正常肝组织、胖瘤及背景噪声的MRI信号强度（SI),计算胖瘤与肝脏组织的信噪比（SNR)、胖瘤-肝脏的对比信噪比（CNR)、每组增强前后之间及增强后三组间CNR的差异。磁共振扫描结束后处死裸昆，切取含瘤肝脏组织做常规HE染色，证实肿瘤模型构建的成功与否；做普鲁士蓝染色，进一步证实不同脂质磁性纳米粒在肝脏中的乾向性分布情况。
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小结
体内MR成像的研究结果表明，三组裸鼠增强后不同时间点T2WI序列肝内肿瘤的SNR较增强前均无显著性差异（p>0.05),正常肝组织的SNR较增强前均有显著性差异(p<0.05 );增强后Gal-SLN-USPIO组种瘤-肝脏的CNR较SLN-USPIO和Gal-SLN-USPIO/PEG组明显提高且有显著性差异（p<0.05)。病理切片HE染色结果表明，本研究所构建的HepG2裸鼠原位移植肝癌模型全部接种成功；普鲁士蓝染色结果表明，Gal-SLN-USPIO组正常肝脏组织中的蓝色铁颗粒明显多于SLN-USPIO 和 Gal-SLN-USPIO/PEG 组，进一步证实 了 Gal-SLN-USPIO 对肝脏的耗向性明显强于SLN-USPIO和Gal-SLN-USPIO/PEG。以上研究结果提示Gal-SLN-USPIO有望成为肝脏乾向的特异性MR探针。
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参考文献（略）