前言
胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤(1)，WHO分为I-IV级，每个级别包括十几种病理亚型(2)，其中III、IV级胶质瘤可占所有胶质瘤的77.5%。通常WHOIII级胶质瘤的中位生存期2?3年，胶质母细胞瘤（WHO IV级）中位生存期仅1年(3, 4)。胶质瘤的预后取决于多种因素和诊治措施，虽然目前恶性胶质瘤的治疗釆用手术治疗、放疗、化疗等多种疗法的综合治疗，但仍有相当多的患者在1年内复发(5)。由于胶质瘤生长的特殊部位，使得手术彻底切除具有相当大的难度，并且极易产生后遗症，降低生活质量。虽然以替莫啤胺为代表的新型化疗药物提高了胶质瘤的化疗疗效，但是由于血脑屏障的存在，化疗的效果极其有限。放射治疗在胶质瘤的治疗中具有极其重要的地位。术后放疗可以降低胶质瘤的复发率，杀灭或抑制残余肿瘤细胞，提高治愈机会。对于无法手术切除的胶质瘤，也能釆取放射治疗的方法控制肿瘤生长，延长生存期，提高生活质量。放射治疗对脑功能的损害低于手术切除，且疗效不受血脑屏障的影响。放疗可延长生存，因此放射治疗在胶质瘤的综合治疗中占有重要地位。高级别胶质瘤应在术后2-4周尽快开始放疗，对胶质瘤母细胞瘤应同步给予替莫吨胺化疗。但即使经过手术切除及放疗+替莫哇胺的综合治疗，多数高级别胶质瘤生存期仍仅有1年。这可能是由于胶质瘤具有抗凋亡和放射抵抗的特点(6, 7),这是胶质瘤治疗效果不理想、易于复发的的重要原因之一。如何提高胶质瘤的放射敏感性，一直是胶质瘤治疗领域的研究重点之一。
近年来胶质瘤分子、基因水平方面的研究正逐步深入。DNA修复酶-06-甲基鸟嘌呤-DNA 甲基转移酶（06-methylguanine DNAmethyltransferase，MGMT)MGMT启动子甲基化是胶质母细胞瘤预后良好的一个指标，在脑胶质瘤组织中的表达与肿瘤细胞的耐药密切相关，并影响肿瘤的化疗效果和病人的预后(8)。MGMT低表达者放疗后假性进展发生率明显高于高表达者，而出现假性进展的患者常有较好的预后。张力蛋白同源10号染色体缺失的磷酸酶基因（phosphataseand tensin homology deleted on chromosome ten, PTEN)基因与预后的关系目前尚无一致的结论。Heimberger等(9)报道在长生存期患者中PTEN的表达是增加的，而Kraus等(10)的研究表明PTEN在大于24个月长生存期患者中的表达与小于6个月的短生存期患者无区别。但在细胞实验中，降低PTEN和增加EGFR表达，可以增强胶质瘤细胞的增殖能力。Lee(ll)等发表的一项研究表明，PTEN基因状态可以提示胶质瘤细胞暴露于电离辖射后的结局。缺失的胶质瘤细胞暴露于电离辖射后细胞发生衰老，并且不伴有细胞调亡。而野生型PTEN的胶质瘤细胞暴露于电离辐射后发生调亡。PTEN基因可能是胶质瘤抗凋亡效应和辖射抵抗性的关键分子之一。近年来的研究发现，某些胶质瘤细胞在接受福射后，并不发生细胞调亡，出现的是细胞衰老现象。细胞衰老是指细胞脱离细胞周期不可逆的停滞于细胞周期的某阶段（一般为G0/G1期），细胞仍然存在一些代谢活性，但却不能再进行增殖，这也是一种重要的肿瘤抑制机制。衰老细胞通常具有某些共同的特征，主要包括以下几个方面：细胞增殖受到永久性的抑制、细胞周期不可逆的阻滞于G1期、细胞发生改变而具有一些功能性上的不同、细胞形态改变，变得扁平而体积增大、衰老相关半乳糖苷酶的活性增高、某些CDKI表达增加。近年来的研究表明，细胞衰老所涉及的主要信号通路包括p53-p21Cipl/Wafl通路，pl9Arf-Mdm2通路和 pl6Ink4a-Rb 通路(12)。Bmi-1属于PcG家族，通过多种途径参与细胞生长、增殖的调节。Bmi-1位于人类染色体lOp 11.23 (13)，DNA长度为4.9千碱基对，mRNA为3199碱基对，编码分子量为37kDa多梳基因家族蛋白，包含326个氨基酸，通常在细胞质或染色体表达。Bmi-1蛋白包含一个位于N-末端的保守的环指形结构域（ring fingerdomain, RF), RF可以与c-Myc基因结合，并共同发挥作用，在细胞恶性增殖和恶性肿瘤发生中有重要地位(14)。Bmi-1可以与其他环指蛋白通过RF位点结合，构成异源二聚体。
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材料与方法
1.细胞培养
1.1.细胞株
人胶质母细胞瘤细胞株U-87 MG购自中国科学院细胞库，按照说明书推荐条件在MEM培养基中培养。
1.2.细胞培养基及相关试剂、仪器
(1) MEM 培养基：购于 Hydone 公司（Thermo Fisher Scientific Inc)。
(2)胎牛血清：购于Hydone公司，分装后冰冻保存，避免反复冻融。
(3) PBS：准确称取 0.2gKCl, 0.2g KH2PO4, 2.88g NaHjPCVlSHsO，8.0gNaCl，溶于双蒸水后，调节pH值至7.2，调增总容积为l000mL,然后高温高压蒸汽灭菌，4°c冷藏储存。
(4) 0.25%胰蛋白酶：取配制好的PBS溶液，量取体积为1000ml，然后以精确天平称取2.5g胰蛋白酶，将其溶解于上述PBS中，随后调节pH值至7.6-7.8,以0.221滤膜过滤除菌，分装后-2°c冰冻保存，避免反复冻融。
(5)青、链霉素溶液（l00x):购于碧云天生物技术研究所，分装后-2°c冰冻保存，避免反复冻融。使用时以1: 99比例加入配制好的完全培养基。
(6)细胞超净台：美国NuAire公司。
(7) 二氧化碳培养箱：HERA CELL 150，美国 Thermo Electron 公司。
(8)水浴箱：上海精宏实验设备有限公司。
(9)离心机：美国Thermo Electron公司。
(10)高压蒸汽灭菌锅：日本Hirayama公司。
(11)微量移液器：Dragonlab，购于大龙医疗设备(上海)有限公司。
(12)液氮罐：美国 Thermo Fisher Scientific 公司。
(13)倒置显微镜：日本奥林巴斯株式会社。
(14)细胞计数板：上海求精生化试剂仪器有限公司。
(15) DMSO：购于碧云天生物技术研究所。
(16)冻存液配制：按照10%DMSO，90%胎牛血清体积含量配制。
(17)细胞冻存管：购于美国Corning公司。
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前言.........24
材料与方法....... 30
结果.......35
讨论.......42
结论.......50
图表....... 55
讨论
胶质瘤是成人脑恶性肿瘤中最常见的类型(32)，是神经系统最常见的原发肿瘤(33)，其中又以胶质母细胞瘤恶性程度最高，生存期最短(34, 35)。胶质瘤好发于大脑半球白质内，浸润生长，边界不清，周围水肿明显，是脑原发性肿瘤中发病率最高，最难治疗的一类肿瘤。目前对胶质瘤主要的治疗方法是最大范围手术切除后，给予局部放疗和以烧化剂为基础的辅助化疗。由于胶质瘤生长的特殊部位，使得手术彻底切除具有相当大的难度，并且极场产生后遗症，降低生活质量(36)。虽然以替莫啤胺为代表的新型化疗药物提高了胶质瘤的化疗疗效，但是由于血脑屏障的存在，化疗的效果极其有限。因此胶质瘤的治疗仍存在难点，患者在确诊胶质瘤后的中位生存期仅有9-12个月(37),目前的综合治疗策略并未能明显提高胶质瘤的总生存期。寻找胶质瘤治疗的新策略，提高胶质瘤治疗的疗效，延长生存期，是目前胶质瘤研究的难点。放射治疗是肿瘤最有效的治疗手段之一。所有的肿瘤患者中，大约有50%的患者在治疗的某阶段需要放疗，而在中枢神经系统肿瘤中，患者接受放射治疗的比例可达92%(38)。放疔在许多肿瘤中可以取代外科手术的作用，例如头颈部肿瘤、宫颈癌、膀腕癌、前列腺癌和皮肤癌等，具有理想的局部控制率，而且与手术相比较具有更好的外观效果。此外，放射治疗除了能对以上列举的肿瘤进行根治性放疗，还可以对某些肿瘤进行姑息治疗。对大约15%的患者，放射治疗是主要的治疗手段，相比较于化学治疗，虽然很多患者在治疗肿瘤的过程中接受了化疗，但总的治愈率只有2%,对生存期延长的贡献率也只有10%。这充分说明放疗作为一种根治性手段在肿瘤的治疗中具有重要作用(39)。
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结论
总之，本研究可以得出如下结论：
1.U87 MG胶质瘤细胞具有辖射抵抗性和抗凋亡的特点。
2.X射线可以抑制U87MG胶质瘤细胞的生长，与剂量强度具有相关性，其抑制效应是通过细胞衰老实现的。
3.U87 MG胶质瘤细胞接受福射后可能存在着逃逸衰老现象，这可能是福射抵抗性的产生机制之一。
4.R0S是X线辐射杀伤U87 MG胶质瘤的重要分子之一，降低福射时产生的ROS水平能增加U87 MG胶质瘤细胞的福射抵抗性。
5.Bmi-l可能参与U87 MG胶质瘤福射后逃逸衰老的过程并在其中具有重要地位。
6. U87 MG胶质瘤辖射后MicroRNA-n8a的表达与剂量强度相关，并有可能参与Bmi-1表达的调控。
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参考文献（略）