前 言
肾型传染性支气管炎(infectious broncheitis nephritis,IBN)是由冠状病毒 IBV 引起的一种鸡的急性、高度接触性传染病。肾型 IBV 感染鸡出现轻微呼吸道症状,肾脏严重损害,排白色絮状稀粪便为主要特征。禽痛风是一种高尿酸血症,是由禽机体内血液中尿酸的排泄障碍或者原发性尿酸盐生成过多而引起的,进而以尿酸盐的形式沉积在关节囊、关节软骨、胸腹腔以及内脏器官表面的一种代谢性疾病。禽痛风在 1766年就早有报道,遍布世界各地,是禽类养殖生产常见的多发性疾病之一,发病率与死亡率高,给养禽业造成巨大损失。氨甲酰合成酶和精氨酸酶在家禽体内缺乏,在新陈代谢过程中,机体产生的氨不能被转化成尿素,而是先合成嘌呤、黄嘌呤和次黄嘌呤,再形成尿酸,最终经肾排出体外。由于尿酸难溶于水,易与钙和钠反应生成尿酸钙和尿酸钠,并容易在内脏表面、肾小管以及关节腔沉积。基于这种生理基础,家禽较易发生高尿酸血症,形成痛风。综合目前研究结果发现,发病机理可总结为以下两点:机体尿酸产生过多和肾脏原发性损伤。就目前而言,发现能引发禽痛风的原因有 20 多种,常见的有高钙日粮、肾型传染性支气管炎病毒感染、传染性法氏囊病病毒感染、隐孢子虫感染、维生素 A缺乏及霉菌毒素中毒等。国内外学者对禽痛风发病机理进行了大量研究,但禽痛风病因及发病作用方式不同,发病机理也有不同的差异,且发病机理非常复杂。近年来,我国禽痛风的发病率尤其集约化饲养的鸡群有上升趋势,饲料生产以及饲养管理水平都存在许多诱发禽痛风的原因,禽痛风已成为常见禽病之一。禽痛风是我国养禽业面临的重要难题之一,其中肾型 IBV 致禽痛风的机理是目前对研究禽痛风机理的主要方面之一。
在肾型 IBV 感染鸡的机理研究中,有人已经用肾型 IBV 成功复制出禽痛风的病例,表明肾型 IBV 可诱使青年蛋鸡发生内脏型痛风,呈现粪便色白稀,肾脏肿大,色苍白,表面呈现花斑状,输尿管呈乳白色,内有尿酸盐结晶等症状。据研究结果表明,肾型 IBV 引起鸡痛风的机制,至今仍不清楚。因此,据目前本病的研究进展,本研究在前人的研究基础上,研究肾型 IBV 感染鸡的血液临床病理学,发病过程中血液中生化指标动态的变化,肝、肾组织中 XOD、bcl-2、bak-1 和 P53 的 mRNA 表达量的变化,以期为阐明肾型 IBV 感染鸡的分子机理提供试验依据。
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第一部分 文献综述
1 肾型 IBV 感染鸡的研究
肾型传染性支气管炎(infectious broncheitis nephritis,IBN)是由冠状病毒 IBV 引起的一种鸡的急性、高度接触性传染病。肾型 IBV 感染鸡出现轻微呼吸道症状,肾脏严重损害,排白色絮状稀粪便为主要特征。禽痛风(Avian gout)是指由于过量的尿酸盐蓄积在禽血液中而不能被排出体外,从而引起机体高尿酸血症,进而尿酸盐沉积在各种脏器表面、关节软骨、关节囊、关节周围、胸腹腔及其他的间质组织中的一种营养代谢性疾病。病禽临床表现为甩头、少食、运动迟缓、精神沉郁、腿翅关节肿大,腹泻且粪便色稀白、衰竭等症状。病理剖检时见到关节表面或者内脏器官表面有着大量白色尿酸盐沉积,肾脏肿大,色苍白,表面呈现花斑状,输尿管呈乳白色,内有尿酸盐结晶等特征。禽痛风遍布世界各地,是商品鸡中常见多发性疾病,发病率达 85%,死亡率高达 30%[1,2],给养殖业带来很大的经济损失。致禽痛风发病的常见原因有肾型 IBV 感染、高钙日粮和霉菌毒素中毒等。其中肾型 IBV 感染是我国目前养禽业造成痛风的主要因素之一。
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1.1 发病简史
禽痛风又称高尿酸血症,早在 1766 年就有人报道,但致病机理至今未完全被了解,1901 年 Banners 根据尿酸盐在体内沉积的部位不同,把禽痛风分为两种类型,分别为关节型和内脏型,他们认为关节型痛风与人类的痛风类似,而内脏型痛风与人的尿毒症极为相似,而且首次将肾脏功能障碍和禽痛风联系起来[3]。内脏型痛风主要特点是尿酸盐沉着在内脏表面;而关节型痛风主要特点尿酸盐沉积在关节腔及其周围。但这两种类型的痛风并不会同时发生在同一个体上。痛风与肾炎占 Gross(1940)尸检 8603 例病禽的报告中的 15%,Brigden 等(1975)统计了某些鸡场疾病的发生率,发现痛风发病率为 16~50%[4-7]。根据报道,我国禽痛风较高死亡率,甚至可高达 30%。而目前实际生产中禽痛风的发病率有上升趋势,尤其在集约化饲养的鸡群[8],饲料生产以及饲养管理水平存在许多诱发禽痛风的原因,禽痛风已经成为常见禽病之一。禽痛风是我国养禽业所面临的重要难题之一,其中肾型 IBV 致禽痛风的机理是目前对研究禽痛风机理的主要方面之一。
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1.2 发病原因
肾型 IBV 是引起禽痛风中众多因素的其中一种,仍不断有新的因素被发现且证实。据统计,其病因多达二十多种,大概归纳起来可以分为两类,一是尿酸排泄障碍;二是体内尿酸生成过多。嗜肾型、引起肾功能损伤的病原微生物有鸡产蛋下降综合征、肾型传染性支气管炎病毒(IBV)[8,9,10]、禽流感病毒[11]、禽腺病毒中的鸡包涵体、败血性霉形体、传染性法氏囊病病毒、肝炎病毒、传染性肾病、鸡传染性肾炎病毒、艾美尔球虫、卡氏住白细胞、雏白痢、螺旋体、组织滴虫、禽白痢杆菌、鸡沙门氏杆菌等。其中,肾型 IBV以高度传染性和死亡率高的特点,给养鸡业造成损失。近年来有报道隐孢子虫所引起的尿路感染而引发鸡痛风的病例[12]。据报道,高钙日粮能诱导鸡痛风[13]。程金科[14]、黎晓敏[15]和郭小权[16]等先后用高钙日粮成功复制出鸡痛风病例。高钙日粮引起机体代谢性碱中毒,血液 PH 升高,破坏了尿酸盐胶体的稳定性,引发禽痛风。Gasotti 等发现钙在尿酸盐沉积的过程中起着重要作用。Wideman 等报道,高钙或低磷可降低尿液的缓冲作用,促进尿酸盐的沉积。钠钾比例不平衡也可引起鸡代谢性碱中毒,从而诱发鸡痛风[14]。在饲养禽日粮中,长期缺乏胆碱、泛酸、维生素 A、维生素 D 和生物素能导致肾小管和输尿管上皮细胞代谢障碍,造成尿酸排泄障碍,从而导致禽痛风。在调节钙磷代谢过程中,维生素 D 缺乏可直接导致钙、磷代谢紊乱,使钙磷比例失调,从而导致禽痛风;一些维生素过量,如维生素 D 和维生素 A 过多,也会导致发病;食盐过多或者供水不足,造成尿液浓缩,从而引起痛风。
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2.试验结果 .......... 19
2.1 临床观察以及剖检 ........... 19
2.2 肾型 IBV 感染鸡血清电解质浓度的变化 ......... 19
2.3 肾型 IBV 感染鸡肾功能指标的变化 .......... 21
2.4 肾型 IBV 感染鸡肝功能指标的变化 .......... 22
2.5 肾型 IBV 感染鸡血清抗氧化指标的变化 ......... 24
2.6 肾型 IBV 感染鸡 XOD 基因 mRNA 表达变化 ........ 25
2.7 肾型 IBV 感染鸡相关凋亡基因 mRNA 表达的变化...... 25
3 讨论 ........... 27
3.1 肾型 IBV 感染对鸡血清电解质浓度的影响 ..... 27
3.2 肾型 IBV 感染对鸡肾功能的影响 ....... 28
3.3 肾型 IBV 感染对鸡肝功能的影响 ....... 28
3.4 肾型 IBV 感染对鸡血清抗氧化指标的影响 ..... 29
3.5 肾型 IBV 感染对鸡肝、肾中 XOD 基因 mRNA 表达的影响 ..... 30
3.6 肾型 IBV 感染对鸡肝、肾中凋亡相关基因 mRNA 表达的影响....... 30
第二部分 试验研究
1 材料与方法
选用1日龄海兰褐雏鸡280羽,按蛋鸡常规免疫程序进行免疫。饲养至35日龄时,挑选240羽体重相近且健康的鸡,随机分为病毒组和对照组,每组3个重复,每个重复40羽。试验第1天,病毒组按鸡胚半数致死量测定结果(10-5/0.2mL)人工滴鼻攻毒,0.2mL/羽;对照组滴鼻双蒸水,0.2ml/羽。饲料中的营养成分均符合NRC标准配制。试验鸡笼养,自由采食、饮水。饲料组成和主要营养成分见表1于试验的第 8 天、第 15 天、第 22 天,每组随机抽 6 只鸡剖检,宰杀前 12 个小时禁食。心脏采血 10mL,置于 37℃恒温箱,使其血清自然析出,再以 2500g 离心5min,制备血清。用 1.5mLEP 管分装后置于-20℃冰箱保存。将鸡处死后解剖取肝、肾放入冻存管后液氮速冻,随后立刻放入-80℃冷冻保存。
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总结
(1)肾型IBV感染会导致鸡的抗氧化能力降低;
(2)肾型IBV感染会导致鸡的血清电解质紊乱、肾脏损伤、肝功能障碍;
(3)肾型IBV感染会导致鸡的肝、肾中XOD基因mRNA表达增强,肾脏中Bak-1和P53基因mRNA表达增强,肾脏中的Bcl-2以及肝脏中Bak-1、P53和Bcl-2基因mRNA表达在试验早期增强。
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参考文献(略)