第一部分 病理大切片、连续病理切片的制备
体表肿瘤大切片技术是将体表肿瘤患者手术切除的肿瘤组织标本按一定厚度、均匀地作整体片状切开、取材, 制作成大切片进行镜下检查, 便于更好地观察完整的肿瘤形态、组织结构间相互关系、病变组织演变过程等, 以利于更准确的总结出肿瘤生长方式规律及肿瘤组织形态学特点。根据取材方法及取材量的不同, 可分为选择性体表肿瘤大切片和连续体表肿瘤大切片两种。前者是选择性切取包括肿瘤组织在内的皮肤组织整体制片,进行镜下检查；后者是将手术切除的体表肿瘤组织标本整体固定、脱水、包埋后连续不间断片状平行切开, 全部取材制片进行镜下观察。选择性体表肿瘤大切片适用于单发病灶、体积较大的肿瘤，如鳞状细胞癌和隆突性皮肤纤维肉瘤(Derm atofibrosarcom a protuburans，DFSP）；连续体表肿瘤大切片适用于单发病灶、体积较小的体表肿瘤，如基底细胞癌。
1.1材料与方法
一、实验对象
收集我院 2010 年-2012 年间临床诊断为体表肿瘤且在整形修复科接受手术治疗患者的肿瘤标本，筛选符合以下条件者纳入实验对象：
A、体表肿瘤首发病例
B、原发体表肿瘤
C、单发病灶且肿瘤在患者体表直径R：R≤10cm
D、无淋巴结转移或远端转移
E、肿瘤组织完整切除，即术中首次送检冰冻报告结果为阴性
F、患者同意成为实验对象，并签署知情同意书共有7例患者标本符合以上6条标准，纳入实验。其中3例2cm＜R≤1cm，4例10cm＜R≤2cm。
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二、实验方法
2.1.术前：测量并记录好肿瘤在患者体表上的直径，标记好扩大切除范围。
2.2术中：在不给创面修复增加不必要的困难的前提下，尽可能扩大完整的切除肿瘤组织，标本离体后，在创面的边缘、基底及可疑有肿瘤细胞残留的部位取小块组织送检冰冻。如果冰冻结果显示阳性，则继续扩大切除，再次送检冰冻，直至冰冻结果全部阴性后修复创面。
2.3标本取材:解剖术后鲜标本固定于木板上,置于-20℃冰箱内冻存6-12h, 观察记录肿瘤切面大小及性状, 依次编号。
2.4标本处理:编号的组织块用10% 福尔马林固定24-48 h, 再置于80%、90%、95%乙醇各12h, 用无水乙醇脱水2次(每次12h),三氯甲烷透明12h, 二甲苯透明2次(每次12h)，以上操作均在常温中进行。之后,于60℃浸蜡2次,每次12h。所用的浸泡池大小应能使组织块平展,一般为30cm-20cm 的耐腐蚀容器,浸泡液体积是标本体积的10-15倍,标本应完全浸泡在浸泡液内。
2. 5包埋、切片及染色:石蜡包埋的组织块软硬适中, 固定于特制的包埋槽中, 整体包埋后。
2.6、切片及染色:将2cm＜R≤1cm的肿瘤组织蜡块置于滑动式切片机上连续不间断切片, 切片厚度为5ｕｍ, 依次编号，标记好顺序；于45℃恒温水浴箱中展片, 捞至常规大小的载玻片上（13cm×8cm）；10cm＜R≤2cm的肿瘤组织蜡块间隔1cm切片，捞至特制的大载玻片上(玻片大小为10cm×6cm,表面涂鸡蛋清与甘油1︰1 混合液防止脱片) , 厚约6-10ｕｍ ,所有切片行HE染色,中性树脂封片。
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第二部分 病理大切片在观察体表肿瘤形态学特征研究中的应用
目前，大切片技术已应用到乳腺肿瘤和消化道肿瘤方面的研究，且技术成熟，本实验首次将大切片技术应用到体表肿瘤形态学的研究，意义重大。
大切片技术不仅可观察肿瘤全貌及其周围正常组织, 还可从不同切面观察整个肿瘤在正常组织内的形态特征变化和生长方式, 判断肿瘤组织与周围正常组织的浸润生长关系，与常规的病理切片相比，普通切片标本取材较小, 一般约为2 cm×1 cm×1 cm , 使某些组织病变的观察受到限制, 不能观察其全貌, 用常规方法取材制片检查易遗漏微小病灶。
一、实验对象
1.1分别从编号为1、2、3的标本中随机抽取10张切片，共30张切片。
1.2编号为4、5、6、7的标本制成的26张大切片。
二、方法
将56张切片在光学纤维镜下逐一观察肿瘤细胞与正常组织之间的关系及肿瘤的形态学特征。
结 果
1.通过对随机抽的取的30张基底细胞癌肿瘤组织切片观察发现：基底细胞样细胞成小叶、带状或条索状增生，基底细胞癌症肿瘤组织，呈现较明显的不对称性，与周围组织界限清楚，基底光滑，深度不超过深筋膜。编号为1-1459的连续切片显示：切片组织边缘仍有肿瘤细胞，疑似肿瘤细胞跳跃性生长。
2、通过对9张鳞状细胞癌肿瘤组织选择性大切片观察发现：鳞状细胞癌向头皮下生长，达到头皮下组织，癌细胞团块与周围间质境界不清，周围炎症反映较轻。
3、通过对17张隆突性皮肤纤维肉瘤组织选择性大切片观察发现：隆突性皮肤纤维肉瘤病变位于真皮层，呈局部浸润性生长，边界不清，镜下可见细长的梭形细胞席纹状和车辐状排列, 肿瘤组织边缘浸润脂肪组织呈蜂窝状结构及呈伪足状分支结构。大切片显示，肿物边缘未见肿瘤细胞残留。
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讨 论
制作大切片时, 由于标本的同一切面包括皮肤、脂肪、皮下腺体和肿瘤组织等, 各组织成分均不相同, 要制作一张理想的大切片, 就必须在处理标本时使体表肿物整片组织在相同的反应时间内经相同试剂处理后同一平面的硬度基本相同, 与石蜡硬度相近。在处理标本的过程中, 不是所有处理时间都是固定不变的, 处理的时间与组织大小、浸泡液的使用次数、温度都有密切的关系,所以要随时观察标本的情况。
捞片时，由于切片组织面积较大，容易脱落或形成褶皱，应预先在特制的大载玻片( 10 cm × 6 cm）表面涂鸡蛋清与甘油1︰1 混合液，以防止脱片)。由于实验条件有限，仅能对2cm＜R≤1cm的肿瘤标本进行连续大切片制作，对于10cm＜R≤2cm的肿瘤标本仅进行了选择行大切片的制作。
体表恶性肿瘤的治疗，手术治疗是最重要的环节，肿瘤组织能否彻底切除与肿瘤复发率直接相关。目前对同一体表恶性肿瘤的切除范围标准尚不统一，即使已有的标准多来自临床经验性总结，而非来自准确的肿瘤形态学方面的依据。现有的术中冰冻切片诊断手段因手术时间和病理检查条件的限制，取材点少、随机性大，缺乏连续性，遗漏率和不准确性高，在具体实施时常导致切除不足或切除过度。因此寻求一种客观的形态学指标来确定肿瘤的切除范围，是达到精准切除的前提条件。
本研究将病理大切片技术，连续病理切片三维重建技术，体视学原理应用到体表肿瘤形态学观察中，建立一套科学的判断肿瘤形态学生长方式的方法体系，初步观察肿瘤生长形态，为日后通过大量样本的形态学观察总结出肿瘤生长方式规律，指导临床手术的进一步实验打下坚实的基础。
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第二部分 病理大切片在观察体表肿瘤形态学特征研究中的应用..........14
材料与方法........................................................................................14
结果....................................................................................................14
讨论...................................................................................................18
第三部分 连续病理切片三维重建图像在观察体表肿瘤形态学特征......19
材料与方法.........................................................................................19
结果....................................................................................................20
讨论...................................................................................................20
第四部分 体视学原理在体表肿瘤形态学研究中的应用........................26
材料与方法.........................................................................................26
结果...................................................................................................28
讨论...................................................................................................30
结论...................................................................................................34
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第四部分 体视学原理体表肿瘤形态学研究中的应用
体视学目前越来越得到科学工作者的重视，尤其是在生医学方面，体视学方法已成为生物组织形态定量研究的基本工具，在医学上将体视学知识与组织切片标本观察联系起来，将是一种可以获取更多信息的研究手段，我们在显微镜下观察到的是平面图像，而这些平面图像是从立体结构中切下来的，单凭平面图像不能反映组织的真实结构，但如果能将切片上的信息收集，并通过体视学的方法加以处理，就可以归纳总结出体表肿瘤的生长范围，形态特点，及与周围组织的浸润关系等。
体视学是从组织的截面所获得的二维测量值与描述着组织的三维参数之间的关系的数学方法的科学，通过对体表肿物的体视学研究，总结体表肿瘤的生长范围和形态学特点。
目前，体视学方法已广泛应用到医学生物领域中，例如，已有科研人员通过体视学的方法测量小鼠大脑体积等。本部分实验通过对手术离体标本的切缘进行病理切片制作，收集HE切片上二维数据的收集，运用体视学方法，归纳总结出体表肿物的形态学特点。
材料与方法
一、实验对象
2010年11月至2012年11月，在我院行手术治疗的会阴部湿疹样癌症患者共计16例，均为老年男性，最小年龄54岁，最大年龄71岁平均年龄60.5岁；发病时间6个月至37个月不等，平均发病时间14.3个月；其中13例患者为首发，3例患者为术后复发；16例患者病变累及阴囊，3例患者病变累及阴茎；16例患者行B超及盆腔 CT 检查均无腹股沟淋巴结转移或远端转移；肿瘤范围直径在7cm至13cm不等；4例患者伴有高血压史，2例患者伴有高血糖史，16例患者均无局部长期化学毒物接触史。
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结 论
1、皮肤肿瘤连续大切片技术应用在肿瘤的浸润特征研究方面具有重要意义，通过对皮肤肿瘤连续大切片的观察，更全面地了解肿瘤在皮肤组织中的浸润特征，为皮肤肿瘤切除范围的判定提供实验依据。
2、数字化病理切片扫描系统及病理切片三维软件对肿瘤的形态学观察具有重要意义，是一种可靠且新颖的观察肿瘤形态学生长方式的方法。不同类型不同时期的肿瘤与周围正常组织的浸润方式不同，肿瘤精准切除的范围需要个性化确定，需要通过对大量的肿瘤病理学三维重建图像进行观察分析总结而得出。
3、体视学方法对肿瘤形态学研究具有指导意义，在体视学原理指导下，通过对6例阴囊Paget’s病患者的离体肿物标本进行病理学分析，总结得出：当肿瘤直径≤10.9cm 时，切除范围扩大至 1.5cm 即可，当肿瘤直径≥10.9 cm 时，切除范围需扩大至2.5cm以上，随着肿瘤直径的增加，肿瘤肉眼可见边缘与病理边缘距离越远，外科手术切除范围越需扩大。
4、由于实验条件有限，病例数量有限，本实验有待于进一步研究，并通过大量病例标本来完善；但本实验建立的科学探讨肿瘤形态学的方法为日后更深入的研究工作打下了结实的基础。
本实验结论对临床工作中术前确定肿瘤扩大切除的范围具有指导意义，在达到根治效果的同时，精准的确定肿瘤组织的切除范围，为临床医师在术前精准确定手术切除范围起到提示指导作用，减少了因术前肿瘤生长范围判断不准确而导致的反复送检冰冻的次数，延长手术时间，增加患者痛苦；同时使患者避免了病灶切除不必要的过大导致的皮肤缺损广泛，给继发的创面修复带来不必要的困难。.....
参考文献（略）