茅莓里有效组分之液质连用和药理作用研究

发布时间:2013-02-01 23:40:20 论文编辑:angela1
第一章文献综述

1.1茅萄简介
茅墓是蔷薇科(Rosaeeae)悬钩子属(Rubu:)植物,拉丁名:RubusParyliusL.,俗称:红梅消、三月泡、蛇泡勃、虎波草、蒋秧蕉。落叶小灌木,高约1米,单数复叶互生;小叶3片,有时5片,中间小叶较大,阔倒卵形或菱状阔卵形,两侧小叶椭圆形,长2一5厘米,宽1.5一5厘米,先端钝,基部阔楔形,边缘有不规则锯齿,有时稍呈浅裂状,上面疏生长毛,下面密生白色绒毛,叶柄长5一12厘米。春末夏初枝顶及上部叶腋抽出聚伞状圆锥花序,有花3一10朵,花梗长2一4.5厘米,密生绒毛,具细钩刺,花尊5裂,裂片披针形,粉红色或紫红色,花冠直径约8毫米,花瓣5,阔倒卵形,雄蕊多数,聚合果卵状球形,直径1.5一2厘米,熟时红色可食。花期5一6月,果期7一8月,生于山坡、荒地、灌丛或草丛中。主要分布在中国、朝鲜、韩国、日本及越南等国,在我国主要分布于河北、山西、陕西、四川、湖南等地。以根或茎、叶入药,可用于治疗感冒发热、咽喉肿痛、肠炎、肝炎、肾炎水肿、泌尿系感染、结石、跌打肿痛、湿疹、皮炎等疾病川。
茅墓作为一种传统中药,其丰富的药理活性引起人们的广泛关注,而这些药理活性的物质基础也激发起国内外科学家们的研究兴趣。目前己有多种分离分析方法被用于茅葛中化学成分的分离和鉴定,以期寻找到其中的有效活性成分。
茅蓦早在很久以前就己被应用于中医临床中,但对其药理活性认识仍停留在经验的基础上,并未从机制上来认识它的药理活性。为了给茅蓦的临床应用寻找到科学的依据,科学家们不断尝试着它的各种药理活性实验。近年来,茅蓦药理活性的研究引起广泛关注,它的抗氧化、抗肿瘤活性、抗脑缺血等活性己被报道,让人们对这种传统中药有了更科学更深入的了解。
人类的很多疾病都是由体内过量的自由基引起,而自由基本身就是人体代谢过程中产生的一种氧化物。具有抗氧化活性的物质,通过清除人体内过量的自由基而起到治疗疾病的目的。故抗氧化活性通常以清除自由基的能力的大小来衡量,目前存在多种抗氧化剂的活性评价方法。

1.2液质联用在天然产物中的应用研究
由于GC一MS在进行分析时,要求样品必须气化,这给它的应用带来很大的局限性,难以用于极性、热不移稳定及大分子化合物的分离分析。此时随着液相色谱(LC)越来越广泛的应用,人们迫切希望实现液相色谱与质谱的联用,与GC一MS在化合物的分析应用范围中形成互补。
直到大气压电离(API)的出现,它成功地解决了液相色谱和质谱联用的接口问题,使液相色谱质谱联用(LC一MS)逐渐发展成为一种成熟的现代分离分析技术。API包括电喷雾电离(Esl)和大气压化学电离(APCI)等技术,其中ESI应用最为广泛。ESI源中化合物分子电离过程,它适合于中等极性及强极性的有机化合物的分析,且能使大分子化合物带上多个电荷,从而将可以测定的化合物的分子量范围扩大。Esl可用于分析的化合物种类十分庞大,包括药物及代谢物、蛋白质、糖类、核酸、聚合物、天然产物、合成有机化合物,甚至是表面活性剂、自组装膜和富勒烯等。而APcl因不能生成带多个电荷的离子,不适用于大分子化合物的分析,其优势在于弱极性或中等极性的小分子的分析,主要应用于环境分析和药物研究等领域。
天然产物往往成分非常复杂,传统的分离分析方法往往步骤繁锁、耗时费力且花费大,液质联用技术由于其具有高效的分离能力、高灵敏度、分析时间短、操作简单、样品消耗少且提供丰富的结构信息等优点,近年来在天然产物的研究中得到广泛的应用。作为天然产物分析的一种十分有效的工具,液质联用以其高效、快速且能进行微量成分分析的优势,在实现天然产物的高通量筛选、加快从天然产物中发现新的先导化合物的方面发挥着越来越重要的作用。
液质联用技术不仅实现天然产物中复杂成分的有效分离、提供化合物分子量信息,同时也通过串联(多级)质谱技术产生碎片离子提供化合物结构的大量信息,甚至包括立体结构方面的信息。其强大的分析功能也使它在天然产物的成分分析中受到越来越多的关注,其应用范围不断扩大,现已用于酚类、生物碱类、皂营类、菇类、内脂类、葱酮类、有机酸等不同结构的天然产物分析中。针对本论文所研究的三菇类及酚类化合物的分析及立体异构体的区分,下面介绍液质联用在这些化合物分析上的应用。

第二章茅蓦正丁醇提取物的液质联用分析及药理活性.....16
2.1引言..................................16
2.2实验部分..................................17
2.3结果与讨论.................9
第三章茅葛乙酸乙醋提取物的液质联用分析............35
3.1引言..........................................35
3.2实验部分....................................36
3.2.1实验试剂...................................36
3.2.2样品制备....................................36
3.2.3高效液相色谱质谱联用.........................37
3.2.4离线傅立汗卜变换离子回旋共振高分辨质谱.......37
3.3结果与讨论.....................................38
3.3.1标准化合物的Esl一Msn分析.......................38
3.3.2茅蓦乙酸乙醋提取物的液质分析....................43
3.4本章小结..................................46
参考文献..................................46
论文总结....................................50

论文总结

本文利用高效液相色谱质谱联用技术(HPLC一MS)对药用植物茅蓦正丁醇及乙酸乙酷提取物中的成分进行快速鉴定,并结合能量分辨曲线对立体异构体进行有效区分。同时对其正丁醇提取物的肝保护作用和抗氧化活性进行了评估。
第一部分采用液质联用技术对茅蓦正丁醇提取物的成分进行了分析,通过负离子模式下多级质谱碎裂信息,结合傅立叶变换离子回旋共振高分辨质谱(FTICR一MS)提供的元素组成信息及相关文献,推断了此提取物中八个主要成分的结构,均为酚类化合物。同时通过四氯化碳致小鼠急性肝损伤实验及DPPH自由基清除实验,分别评估了茅暮正丁醇提取物的肝保护和抗氧化活性。结果表明此提取物具有显著的肝保护作用和抗氧化活性,并推测这些活性主要由其含有的酚类化合物所引起。
第二部分利用液质联用技术区分了茅毒乙酸乙醋提取物中非对映异构的乌苏烷型三菇。从标准化合物(包括2对非对映异构的乌苏烷型三菇)的多级电喷雾质谱实验找出区分3a一OH和邓一OH型乌苏烷型三菇的质谱碎裂特征。对于邓一OH化合物,三级质谱图中碎片离子M一H一HZoHCoOH的相对丰度明显高于M一H一HZO一COZ一离子。然而对于3a一oH化合物,[M一H一HZo一HeooH]一离子的相对丰度则低于M一H一HZo一C02离子。基于此规律以及能量分辨质谱实验结果,茅葺乙酸乙酷提取物中九个乌苏烷型三菇被鉴定,其中包括4对在C一3位上异构的非对映异构体。
通过液质联用鉴定的17个化合物中,14个化合物在茅毒这种植物中是首次被报道。本研究将液质联用技术成功运用在天然产物的研究中,实现了复杂成分的快速、有效的分离分析。

参考文献
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