鳖甲煎丸与罗格列酮药物血清对TGFβ1刺激大鼠肝星状细胞增殖的影响和防治作用

发布时间:2013-01-21 11:13:26 论文编辑:angela1
第一部分

鳖甲煎丸和罗格列酮对TGF-β1刺激下的大鼠肝星状细胞外ColIV,LN的分泌合成及增殖影响引起肝硬化的原因很多,在我国以乙型病毒性肝炎所致的肝硬化最为常见。此外还有其他的慢性病毒性肝炎、慢性酒精性肝病、慢性药物性肝病及脂肪性肝炎等均可引起肝纤维化。如同时伴有肝小叶结构的破坏,假小叶形成,则形成肝硬化,严重者可发生肝性脑病甚至肝癌等严重并发症。几十年来国家投入了大量的人力、物力和财力,通过基础和临床研究表明,如果采用祛除病因、保护肝细胞以及降解胶原纤维等综合治疗,肝纤维化是可以被阻滞甚至逆转的。
目前认为肝纤维化是肝损害持续存在,组织发生修复反应时因细胞ECM合成、降解与沉积不平衡而引起的病理过程。在肝脏纤维化的过程中HSCs激活并转化为肌成纤维细胞样细胞是肝纤维化发生、发展的关键环节。虽然多种细胞参与了肝纤维化的形成,然而激活的HSCs是促进ECM过度沉积的主要细胞。LN是一种非胶原蛋白,分子量约900KD,由三条链组成,由储脂肪细胞和内皮细胞等合成,在基底膜透明层广泛分布,与COL-IV构成基底膜骨架,在肝纤维化时在肝窦内皮细胞间隙大量沉积,并与肝纤维化的发生发展、肿瘤的浸润转移等相关。COL-IV在细胞内合成后直接以前胶原形式参与ECM的构成,是基底膜的主要成分,主要存在于汇管小血管及Disse腔周围。正常人肝组织胶原总量中只有1%含量是COL-IV,在细胞分化、黏附和基因表达中起关键作用。在正常情况下,肝内的所有细胞均会参与ECM的合成,大多数COL-IV及LN由HSC和内皮细胞合成,而内皮细胞合成COL-IV及LN远多于HSCs。而在肝纤维化时HSCs成为了ECM合成的主要细胞,合成的ECM不仅有量的变化,而且有质的改变。
中医学无纤维化一词,据其临床表现相当于中医学鼓胀、积聚、胁痛等范畴,其病机有湿热、痰浊、肝郁、血瘀等不同。治法则不外乎扶正固本、驱邪排毒、活血化瘀等。近年来中药对肝纤维化的研究机制日渐深入,内容涉及到细胞因子信号传导通路、细胞凋亡、调控基因的表达等方面,但由于动物模型的局限性、中药复方成分的复杂性、疗效评定的不统一等原因,肝纤维化的治疗正面临众多问题,而充分发挥中医理论的优势,将整体研究、宏观调控与微观研究相结合,对肝纤维化的治疗和中医药的发展将具有重要意义。在肝纤维化发生发展的整个过程中,血液瘀滞贯穿始终,为其病机关键。根据中医学理论,针对这一病机关键,采取同样的活血化瘀方药如鳖甲煎丸进行治疗,临床获得良好疗效,但对于其疗效机制还需要深入系统的研究。
罗格列酮为PPARγ的合成配体,为PPARγ激动剂,PPARγ活化可以抑制ECMmRNA的表达,使ECM合成减少,PPARγ还可以抑制TGF-β1激活HSCs的通路,促进HSCs凋亡,逆转肝纤维化,但其具体作用机制和作用途径还需要研究。
血清药理学是一种离体实验的方法,对于中药复方制剂极其复杂的化学成分,经过体外煎煮或者其他过程制备,再经口服后在体内发生一系列变化,有的是药物本身作用发挥,有的是产物经过肝脏代谢的作用发挥,有的是通过第二信使起间接作用。因此,以中药粗提取物进行体外实验的结果来评价药物在体内效应是不确切的也是不客观的。但是含药血清却能使药物在体内中产生药理作用的真实过程更好的反映,从理论上更具有真实性和科学性。用含药血清进行中药作用的研究观察,拓展了中药研究的手段与方法,有助于从细胞分子水平上探讨中药的作用机制。本研究采用血清药理学方法,对正常大鼠提取药物血清进行体外实验。
本实验通过研究高中低三个不同剂量的罗格列酮和鳖甲煎丸大鼠药物血清对Col-IV,LN等细胞外ECM合成分泌的影响及对HSCs增殖的影响,比较其作用效果并分析其可能的作用机制。

材料与方法……………13
结果…………………..17
附图……………………..19
讨论……………………23
小结……………………25
参考文献……………………25
第二部分鳖甲煎丸和罗格列酮对由TGF-β1刺激的肝星状细胞MMP-9,TIMP-1,smad7 mRNA表达的影响
前言……………………27
材料与方法……………………28
结果……………………32
讨论……………………39
小结……………………42
参考文献……………………43
结论……………………44
综述……………………47

结论

1.TGF-β1促进HSC增殖活化,使TIMPs和MMPs之间合成与降解失衡,ECM沉积加剧,其作用可能与抑制Smad7蛋白表达,激活TGF-β/Smad信号转导通路有关。
2.鳖甲煎丸与罗格列酮均可抑制TGF-β1上述作用,高剂量鳖甲煎丸组作用强于罗格列酮,说明其抑制肝纤维化效果确切。
3.鳖甲煎丸对抗TGF-β1作用的效果呈显著量效关系,即随鳖甲煎丸药物血清浓度升高,抑制ESC活化增殖,增加Smad7蛋白表达及调节TIMPs和MMPs平衡的作用逐渐增强。
4.不同浓度鳖甲煎丸和罗格列酮药物血清均无法完全使被TGF-β激活的HSC恢复到刺激前状态。

参考文献
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