第一部分文献研究与立题依据
第一节大蒜的研究概况
1.1大蒜的主要化学成分
大蒜又称葫蒜或麝香草，属百合科葱属植物蒜(Allium sativum L.)的地下鳞茎，五月叶枯时采摘，晾干，备用。它不仅作为膳食的常用佐料，也是常用的中药之一。其性味生辛热、熟辛温，具有温中消食、化肉消谷、解毒除邪、攻冷积和杀虫的功效。大蒜的主要成分包括糖类、氨基酸类、脂质类、酶类、多肽类、含硫化合物及多种维生素、微量元素等。大蒜含有人体中几乎所有的必须氨基酸和人体所需微量元素，其中以半胱氨酸及磷的含量最高，其次为镁、钙、铁、硅、铝、锌以及稀有元素硒、锗等。
1.2大蒜的药理作用
(1)抗血小板聚集作用
1981年Ariga对大蒜不同成分抗血小板聚集进行了研究。从大蒜油中分离出的丙二稀一硫化物、丙二炼二硫化物、甲烯丙基三碱化物（MATS)、二稀丙基三硫化物（DATS)均有抗血小板聚集怍用，其中以MATS最强，DATS次之。黄雅乐、王金凤等研究表明在家兔高血脂症和动脉硬化模型上，大蒜精油能降低凝血因子VII的活性及血衆丙二醛水平。用止血敏、肝素、大蒜液对小鼠通过腹腔注射及尾静脉注射，用毛细玻管法及玻片法观察对血凝时间的影响，结果表明止血敏可明显縮短血凝时间，而肝素、大蒜精油能明显延长血凝时间。 BordiaA对6名健康人体外血小板聚集性研究表明，在每毫升富含血小板血装(PRP)中分别含有2.5、5、10 |ig大蒜精油时与对照管相比，均能降低由ADP、肾上腺素、胶原所诱导的血小板聚集，抗聚集效果与所用剂量成正比。反皿8-011 Chan研究发现大鼠灌胃给药5 mg-kg'或者50 mg-kg^的大蒜油可以显著延长大鼠的出血时间和凝血时间，推论大蒜油具有抗ADP诱导的血小板聚集作用[iG]。 Block等从大蒜提取物及衍生物进行抗血小扳聚集性研究中篩选出一种称为阿焦稀的硫化物，具有强烈抗血小板聚集作用。可抑制各种诱导物包括钙离子载体引起的血小扳聚集。防止在体外人工表面或猪的损伤动脉壁上高切率和低切率下的血栓形成，推论其机理为阿焦烯能抑制纤维蛋白原的粘附。
(2)降血脂作用
邹丹等研究发现中华大蒜油可明显降低实验动物兔血清甘油三酯(TC)、胆固醇(Ch)、低密度脂蛋白(LDL-C)、极低密度脂蛋白(VLDL-C)、并能降低血清总胆固醇与高密度脂蛋白胆固醇的比值，认为中华大蒜油对家兔实验性高脂血症具有防治作用。乔海灵等研究发现中华大蒜油可明显降低高脂血症模型大鼠血清TG、 TC、LDL-C、 VLDL-C.并能降低血清总胆固醇与高密度脂蛋白胆固醇的比值，认为中华大蒜油对大鼠实验性高脂血症具有明显防治作用。黄雅乐在复制高血脂和动脉硬化（As)模型观察大蒜精油对其影响时发现，大蒜精油能防止血栓素/前列环素、胆固醇、低密度脂蛋白、载脂蛋白B及丙二醇升高，能起到预防AS的形成作用。 Reinhart等将大蒜对血脂参数的影响进行了系统评价和聚类分析，大蒜降低总胆固醇、甘油三酯中等水平，但低密度脂蛋白和高密度脂蛋白无明显变化。生、熟大蒜可改善血脂代谢，尤其血清总胆固醇和低密度脂蛋白水平。Yeh和Liu运用大鼠肝细胞培养，发现用新鲜大蒜的水提物、甲醇提取物、石油醚提取物和老蒜的水提液可抑制44%-87%TC合成，提示大蒜的亲水和疏水化合物对胆固醇合成有抑制作用，并进一步研究了不同大蒜水提物对脂肪酸和脂质生物合成的影响。 Thomson M等研究发现，通过口服和向腹膜内给大鼠喂食生的和煮沸的大蒜水溶性提取物，喂食生蒜的能显著降低大鼠血脂中胆固醇11-14%和甘油三酯38%,但喂食煮沸的作用相对较小。有临床报道大蒜合并鱼油可显著降低总Ch、 HDL-C及LDL-C/HDL-C比值，改善血脂与脂蛋白的代谢气另外，大蒜联合果胶能减轻家兔HC,但未明显影响T****平。尹黎明等报道采用大蒜素（每天6mg-kg-')及燕麦复合饲料喂HT大鼠8周，血清TC、 TG、 VLDL和LDL水平显著降低，具有理想的降低血脂和改善血液流变学作用。
大蒜中含挥发油0.2%，由20余种硫醚化合物组成，是大蒜中具有抗癌、防癌作用的主要化学成分。当完整大蒜细胞受损时蒜酶释出，催化蒜氨酸产生硫代亚磺酸酯即大蒜辣素。大蒜辣素不稳定，进一步分解形成二烯丙基硫化物（DAS)、 二烯丙基二硫化物(DADS). 二烯丙基三硫化物（DATS)及阿焦烯（ajoene)等脂溶性含硫化合物。研究证明大蒜素中所特有的有机含硫化合物不仅对许多革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌以及真菌有很强的杀菌作用，而且还可抑制肿瘤的发生。大蒜素对肿瘤细胞的毒性作用首先引起肿瘤细胞膜的破坏，增加细胞的通透性，大蒜素进入肿瘤细胞后。一方面作用于细胞核，使处于分裂期的核破裂、染色体崩解，使代谢功能活跃的肿瘤细胞核染色质凝缩，乃至核膜破裂，核质溢出，对细胞柴中的细胞器的功能和结合产生毒性抑制或破坏作用，肿瘤细胞出现障碍，发生退行性改变，以致最终导致肿瘤细胞的死亡。近年国内外的流行病学调查和实验研究均表明大蒜素对胃癌、结肠癌、肝癌、肺癌、前列腺癌、乳腺癌、白血病等多种肿瘤均有明显抑制作用。大蒜抗肿瘤主要途径有影响致癌物的代谢、阻断致癌物质的合成、诱导肿瘤细胞凋亡、影响细胞周期、抗氧化作用、免疫调节以及对抗肿瘤药物的增敏作用。
近年来，世界各国的科学家对大蒜的研究十分活跃，获得了可喜的新成果。认为大蒜有抗感染、抗菌、抗病毒之功效。现有研究发现大蒜提取物具有广谱的抗菌活性，对常见的G+和G—细菌均有较好的抗菌作用，包括埃希氏菌、葡萄球菌、粪肠球菌、链球菌、克雷伯菌、卡他莫拉菌、幽门螺杆菌等，甚至耐酸的结核分枝杆菌对其也具有一定的敏感性。大蒜素体外抗曲霉及播散性曲霉病大鼠模型的体内研究发现，其体外MIC8和MFCs分别为8mg_L—i和32mg_L;i，时间-杀菌曲线发现其在12 h内均具有较好的杀真效力，大蒜素治疗组大鼠的存活时间较对照组明显延长(21.3dvs7.7d)。大蒜对真菌也有较强的抑制和杀灭作用。低浓度的大蒜提取物主要抑制真菌生长，使迟缓期延长至32 h，高浓度可完全杀死真菌。临床已用于治疗隐球菌引起的脑膜炎、肺部及消化道霉菌感染、白色念球菌引起的小儿消化不良、头癣等。王满霞等研究发现大蒜提取物对人类免疫缺陷病毒I型（HIV-1)及呼吸道感染有关病毒有一定抑制作用，说明大蒜提取物有较广的抗病毒谱，为临床用其治疗艾滋病及上呼吸道感染提供了参考依据。
第二部分实验研究与结果分析...........10
第一章大蒜与氯吡格雷药理作用研究.......10
第一节大蒜与氯吡格雷合用对小鼠出、凝血时间的影响........10
第二节大蒜与氯吡格雷合用抗血小板聚集作用研究........12
第三节大蒜与氯吡格雷对大鼠体内对氧磷脂酶-1及血常规的影响......17
第二章大蒜对氯吡格雷药动学的影响.........22
第一节生物样品中氯吡格雷LC-MS/MS分析方法的建立.......22
第二节大蒜对氯吡格雷药代动力学的影响.........30
第三章大蒜对大鼠体内细胞色素P450酶活性的影响......45
第一节生物样品中咪达唑仑LC-MS/MS分析方法的建立......45
第二节大蒜提取物对咪达唑仑药动学影响......53
第三节大蒜对大鼠体内CYP3A4表达的影响......59
结论与展望........62
参考文献........64
结论与展望
一结论
本课题的研究类容主要包括三个方面：（1)大蒜与氯吡格雷药理作用研究；（2)大蒜对氯吡格雷药动学的影响；（3)大蒜对大鼠体内细胞色素P450酶活性的影响。
1大蒜提取物可显著延长小鼠出、凝血时间，大蒜与氯吡格雷合用可提高氯吡格雷的抗凝血药理作用。大鼠灌胃给药大蒜提取物具有一定的抗血小板聚集作用，大蒜与氯吡格雷合用可显著提高氯吡格雷的抗血小板聚集作用。长期灌胃给药大蒜提取物可以提高大鼠体内对氧磷脂酶-I的活性，大蒜与氯吡格雷合用对大鼠血常规无影响。
2大蒜提取物对氯吡格雷药动学参数有显著影响，大鼠灌胃给药大蒜提取物两个星期，对单次给药氯吡格雷和多次给药氯吡格雷药动学参数都有显著的影响。与正常对照组比单次给药氯吡格雷，大蒜组大鼠体内氯吡格雷最大血药浓度Cmax增加了 25%，氯吡格雷药-时曲线下面积AUCQ_^增加了 31%，氯吡格雷活性代谢产物最大血药浓度Cmax增加了 39%，氯吡格雷活性代谢产物药-时曲线下面积AUCo^o增加了 48%，与正常对照组比多次给药氯吡格雷，大蒜组大鼠体内氯吡格雷最大血药浓度Cmax增加了 13%，氯吡格雷药-时曲线下面积AUCo^o增加了 23%，氯吡格雷活性代谢产物最大血药浓度Cmax增加了 21%，氯吡格雷活性代谢产物药-时曲线下面积AUCo^o增加了 24%。
3大鼠灌胃给药大蒜提取物两个星期，与对照组相比，大蒜组的咪达唑仑的平均药时曲线下面积（AUC)显著减小（p< 0.01)，大蒜组咪达唑仑的最大血药浓度Cmax明显小于对照组（p<0.01)。大蒜组咪达唑仑的绝对生物利用度分别为对照组的73.1%， 65.1%和58.1%，说明连续灌胃给药大蒜提取物两个星期可降低咪达唑仑在大鼠体内的生物利用度。Western-blot测定CYP3A蛋白结果进一步表明灌胃给药大蒜提取物两个星期可以诱导大鼠体内CYP3A蛋白的表达。
综上所述，大蒜有抗血小板聚集药效，大蒜与氯吡格雷合用可以提高氯吡格雷抗血小板聚集药理作用，并对血常规无明显影响。
二展望临
床上联合用药的情况越来越受到重视，中药和化学药物联合应用的现象己经十分普遍，合理的联合用药可以提高疗效、延缓耐受或耐药性的产生，治疗多种疾病；但不恰当的联合用药不仅不能提高疗效，反而引起有害的药物相互作用，产生各种不良反应，其中多数与影响细胞色素P450和药物转运体有关。中药成分复杂、应用疗程较长，对西药的吸收、分布、代谢和排泄过程都会产生一定的影响，从而引起治疗作用的增强或减弱，毒、副反应的减少或增加，作用时间的延长或缩短。所以中西医在临床联合应用时要特别注意中西药的药物相互作用。本文对大蒜与氯吡格雷的药物相互作用做了初步探讨，今后还可以在以下几个方面进行深入研究：
1研究大蒜有效部位，或从大蒜中提取的单体成分的抗血小板聚集作用，并研究有效部位或单体成分与氯吡格雷的药物相互作用。
2细胞色素P450是一个庞大的体系，包括多种亚型，CYP3A只是其中一个亚型而已，以后的工作可以考察大蒜提取物对体内其他细胞色素酶活性的影响。
3药物转运体在药物相互作用中发挥着重要作用，诱导或抑制体内的药物转运体也可能导致药物相互作用的发生，下一步工作可以研究大蒜提取物对药物转运体的诱导或抑制作用。
4更深入的研究大蒜与氯吡格雷联合应用用抗血小板聚集作用机制。
三创新性
1液质联用测定氯吡格雷在大鼠体内的浓度，并用相对定量法计算氯吡格雷代谢产物在大鼠体内的相对浓度。
2对大蒜提高氯吡格雷药效的作用机制做了初步探讨。
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