第1章文献综述
1.1细菌主动外排耐药机制
细齒的外排系统是一种非特异性耐药机制，它是由药物主动外排泉来完成的。药物主动外排泵是一类位于细胞膜上的:A有特殊结构的膜转运蛋白质，当细胞内的药物浓度聚集达到一定量时，药物外排泵相关mRNA的表达量便会增加，使细胞膜上外排泵的数量增加，药物泵出菌体，从而加强细菌在药物选择压力下的生存能力，产生耐药性。主动外排泵系统一般由3部分组成：外膜通道蛋白、融合蛋白和胞质膜外排蛋。依据氨基酸序列的同源性，可将与抗微生物药物外排相关的膜外排泵分为5个主耍超家族：ATP结合盒超家族(ATP-binding cassette Superfamily, ABC);小多重而纩药家族(Small Multidrug ResistanceFamily,SMR);主耍易化子超家族(Major Facilitator Superfamily, MFS);多药及毒性化合物外排家族(Multidrug and Toxic Compound Extrusion Family , MATE)和耐药节结化细胞分化家族(Resistance I Nodulation I Cell Division Family, RND)。其中后3类家族均以质于驱动力为能量，以"H+-药物"结合的方式向胞外作反向转运。
目前，研究最多的是AcrAB-Tolc外排菜的结构组成。AcrAB-Tolc是火肠埃希菌最主耍的多药外排泵包括药物质亍转运亍AcrB、周质融合蛋AcrA和外膜通道蛋白Tolc正常环境中，外排菜AcrAB-TolC的表达有助于帮助火肠埃希氏齒抵抗肠道胆盐、脂肪酸等疏水性物质的佼入，但在某些特殊条件下，由丁 acrAB的超高水平表达，造成对多种化合物的耐受气。
1.2中药逆转细菌耐药
几千年来，中药在防治疾病中发挥着重耍作用。特别是在两药抗菌遇到极大困难的今天，在中药中寻找更有发展潜力的药物来对抗强大的耐药齒群，显得尤为重要。
有些中药有效成分可直接作用于菌体，其抑菌机理是通过调动动物机体内在的积极因素，降低细茵毒力和减轻对组织细胞的破坏作用等途径起到抑菌抗菌作川。研究证实单味中药及一些复方中药在抗齒方面具有独特优势。
抗iMf中药有着广泛的筛选范围，如清热解毒药、补虚药、理血药、》:y下药等。就其机制而言有S接作用于细茵结构和干扰代谢而达到抑茵效果的中药，如黄连的有效成分小楽碱；大蒜的抑茵作ffl为大蒜辣素分子中的氧原子与细菌生长繁殖所必需的半胱氨酸分子中的巯基结合，使后者变为非活性物质，干扰细菌代谢，从而抑制细齒的生长和繁殖。此外研究结果发现,清热解毒药、补虚药、理血药、汚下药等大部分药物均对畜禽的一些病原体有直接抑制和杀灭作用，如连翘、板根、野菊花、藿香、金银花、蒲公英、鱼腥草、戟天、玉竹、梅叶、牛膝、女贞子、松针粉、肉桂、白芍-、柴胡、紫草、何首乌、枸杞子、麦冬、肉苁蓉、青黛、刺五加、桔梗、青蒿等。以往发现的抗菌药大多局限为清热解毒药或淸热凉血药，且药物性味多偏于凉苦，如:决明子、黄尊、黄连、黄柏等，随着化学、药理、微生物等各学科的联系日趋紧密，研究的更加深入，具有其它功效的中药也被相继开发出来，如活血药中的鸡血藤、益母草、丹参、牛膝，补虚药中的黄1?、党参等都A有抗菌作用。
第2章引言……..9
2.1研究目的和意义……………9
2.2研究范围和内容………………9
第3章临床野生菌单一外排耐药机制耐药大肠埃希菌耐………………...11
3.1材料与方法………………11
3. 2结果……………… 16
3.3分析与讨论………………26
第4章中药细菌外排泵抑制剂的筛选………………29
4.1材料与方法………………29
4.2结果………………31
4.3分析与讨论………………34
第5章中药提取物对大肠埃希菌体内乳酸环丙沙星………………37
5.1材料与方法………………37
5.2结果………………38
5.3分析与讨论………………40
第6章中药提取物对耐药大肠埃希菌acrA基因表达量的影响…………43
6.1材料与方法………………43
6.2结果……………… 46
6.3分析与讨论………………49
第7章结论………………51
参考文献………………53
第7章结论
由以上六部分的研究，可以得出如下结论：
1.通过对本研究室保存20株临床分离、鉴定多重耐药火肠埃希菌进行gyrA和parC基闪耐药决定区PCR扩增与产物测序分析，多重耐药大肠埃希菌靶基因突变率为80%，与细齒耐药问题存在相关性。
2.通过对临床常见100味（200种）中草药进行有效成分提取，进行抑菌试验和联合抑茵试验。其中146种中药提取物对临床分离耐药大肠埃希茵存在抑菌作用，除苍耳子水煎剂、灯芯草水煎剂、女贞子水煎剂、桑白皮醇提液、天仙子醇提液与水煎剂、藩香水煎剂、鸡冠花醇提液8种中药提取物产生了耐药性外，耐药大肠埃希菌对其余中药提取物均不存在耐药性。
3.联合试验结果表明，中药提取物A，B，C,D存在耐药抑制作用，可使乳酸环丙沙对于多重耐药大肠埃希齒73-2的最小抑茵浓度下降4~16倍。
4.应W高效液相色谱法检测质控齒和耐药iM(模型在分别加入亚抑茵浓度四种中药提取物前后，细齒体内乳酸环沙虽(Cip)的摄入量。亚抑齒中药提取物可以增加大肠埃希齒体内乳酸环丙沙^的蓄积量，表现出良好的外排抑制作
5.通过亚抑菌浓度中药提取物处理大肠埃希菌耐药菌，利用炎光定SPCR技术（Real-TimeFluorescent Quantitative PCR)检测其外排泵基因acrA表达量的变化。四种亚抑菌浓度中药提取物对大肠埃希耐药菌的外排泵基冈表达量有明显的抑制作用。
参考文献
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