前言
半个世纪以前，“癌症”还是一个陌生的词汇。但在短短的五十年后，癌症却成为和人们关系最为密切的疾病之一，发病率和死亡率都位居“前三甲”。为了使癌症化疗的效果更加显著，必须满足以下几点：首先，抗肿瘤药物在体内肿瘤的微环境下必须有效。第二，抗肿瘤药物必须能够以有效的药物浓度到达肿瘤细胞。第三，药物对于体内的正常组织必须低毒性。一般来讲，大部分的低分子量的抗肿瘤药物并不能够有效的选择进入肿瘤细胞，因为这些小分子药物能够通过被动扩散的方式渗透到所有器官组织中的细胞。因此，为了获得更有效的化疗效果，抗肿瘤药物必须能够主动靶向到肿瘤细胞，并且要具有较强的渗透性。经过多年的研究，出现了很多具有应用前景的药物转运体系，包括聚合物药物轭合物、纳米粒、脂质体、胶束或树状大分子等。如聚合物药物轭合物利用增强和渗透的 EPR 效应已经被应用到肿瘤治疗中，已有多种聚合物前药体系处于临床前的研究阶段。而纳米粒以物理包封的形式可负载更多的药物并通过修饰上各种配体或抗体，提高载体的靶向性，减小对正常组织的损伤。基于以上种种因素，本研究的目的包括以下两点：首先，制备得到一种新型的阿霉素聚合物前药体系一方面增强阿霉素的水溶性，另外提高其靶向性，减少对正常组织的毒副作用。然后自组装进一步得到纳米粒，包封更多的阿霉素入胞，增强其抗肿瘤活性。
文献回顾································10
正 文·······························34
实验一 叶酸-普鲁兰多糖-阿霉素聚合物药物载体·······34
1 材料和仪器 ·······························34
2 实验方法 ·······································34
3 结果与讨论 ·······················37
实验二 FA-MP-DOX 纳米粒的制备及性质研究 ·················50
1 材料和仪器 ···································50
2 实验方法 ··································50
3 结果与讨论 ·································52
小结·································56
参考文献···························57
小结
本研究中采用普鲁兰多糖为载体，酰胺键键合上抗肿瘤药物阿霉素制备成聚合物药物 MP-DOX，继而将叶酸与聚合物药物键合，制备得到FA-MP-DOX，提高聚合物药的靶向性，降低药物的对正常组织的毒副作用，以期达到控释和靶向双重目的。通过体外释药和细胞毒性研究，我们发现阿霉素释放具有 pH 依赖性，在生理 pH 时较少的释放药物，而在更酸性的环境下（pH2.5 或 pH5.0），阿霉素释放的较快，这种特性非常适用于抗肿瘤药物的靶向释放，因为实体瘤内部存在不同的酸性环境，包括细胞间质中的弱酸性环境 (extracellular pH，pHe)、癌细胞中内涵体和溶酶体中更强的酸性环境。肿瘤细胞中早期内涵体的 pH 值在 6.0 左右，有的甚至低于 5.4, 而晚期内涵体的 pH 值一般在 5.0 左右，而溶酶体(lysosome)的 pH 值(pHL)更低(4.0-5.0)。但是由于多药耐药性的存在，使得这种 pH 响应的释药体系入胞效率较低，因此通过键合叶酸等配体，可主动靶向到其受体高表达的肿瘤细胞表面，提高其入胞效率，发挥抗肿瘤药物的药效。细胞毒性试验表明FA-MP-DOX 聚合物药物能够提高内吞效率，细胞致死率明显增大。
为了提高阿霉素的载药量，本实验中将 FA-MP-DOX 轭合物采用自组装透析法制备得到包载阿霉素的 FA-MP-DOX 纳米粒。透射电镜观察制备得到的纳米粒形态圆整，分布均匀。动态光散射法测得其粒径分布在 150nm 左右。该尺寸的纳米粒如果应用在体内可以躲避网状内皮系统的识别和吞噬，为以后的体内实验奠定了基础。键合的阿霉素和物理包封的阿霉素之间非共价作用力产生使得纳米粒性质愈加稳定，无论是包载的药物还是化学键合上的药物从纳米粒释放时均显示出良好的缓释特性及 pH 依赖性（在生理 pH 时释放的很少），进一步提高了 FA-MP-DOX 聚合物药物的靶向性，减小对正常组织的副作用，可有望成为一种阿霉素智能型控释和靶向性前药体系。