本文是一篇医学论文，本研究证明linc01527在胃癌患者的肿瘤组织中对比相关的正常组织低表达。
第2章 综述
2.1 胃癌的流行病学与诊疗现状
胃癌（gastric cancer，GC）是世界范围内第二大癌症死亡病因，根据WHO数据显示，2020年全球胃癌新发和死亡病例数分别为108.9万、76.9万例，约占恶性肿瘤相关死亡病例的7.7%[8, 9]。由于胃癌与饮食等因素相关，故而欠发达国家中胃癌发病死亡率所占比重可能更为突出。在我国，胃癌在居民癌症发病和死亡率中分列第三位和第四位，在WHO的统计中，2020年我国新发和死亡的胃癌患者人数分别为47.9万人和37.4万人，分别占全球胃癌新发和死亡病例的44.0%和48.6%[8, 9]。另外，我国早期胃癌仅占比20%，新发病例多以及发现晚，导致了目前我国胃癌的严峻形势，严重威胁人民的生命健康，也成为了我国卫生系统亟待解决的一项重大公共卫生问题[9]。
多种环境因素和遗传因素的相互作用造就了胃癌的多因素、多步骤参与演变的复杂过程。目前已经比较明确的危险因素有Hp感染[10]、饮食及饮食习惯[11-13]、吸烟[14]、饮酒[15]、家族遗传[16]等。另外，还有研究显示摄入足量的膳食纤维[17]和维生素[18]，是降低胃癌发病风险的重要因素。危险因素的研究对胃癌的一级预防以及有针对性的二级预防均有重要意义。
一般胃癌尤其是早期胃癌，没有显著的体征和临床表现。胃癌进展期常有腹部上区的不适或隐痛以及恶心、腹泻等消化道相关症状，同时还可能存在体重减轻、贫血等慢性消耗性症状。除此以外，当肿瘤侵袭其他脏器或组织时，还可有腹部压痛、肿块、肠梗阻、腹水等症状和体征。胃癌的辅助检查目前常用X线气钡双重对比造影、超声检查、CT、MRI、PET-CT、单光子发射计算机体层摄影、肿瘤标志物、胃镜检查等手段，其中胃镜检查是用于筛查和治疗早期胃癌的重要手段[19]。
2.2 长链非编码RNA的研究背景
人类基因组中只有1%-2%的DNA能够被转录成编码蛋白mRNA，而大量ncRNA则不能编码蛋白质，但却分布在细胞的各个角落，执行各自的功能。其中，一类长度超过200nt的ncRNA，即lncRNA，它们能够在细胞内部发挥重要作用，从而改变细胞的功能和生物学行为。尽管lncRNA一度被误解为转录噪声，但随着研究的深入，人们逐渐意识到lncRNA在细胞中扮演的重要角色。
研究表明，lncRNA可以根据功能被分为四类作用：信号传递、诱导作用、调节作用以及支撑作用。LncRNA可以被用作指示标，可以与特定的信号通路相关联；也可以作为诱饵，隔离靶基因的启动子，使转录信号无法完成基因的激活，或者自身激活下游靶基因的表达；此外，lncRNA还可以用作酶复合物的中介，引导其结合到特定的目的基因启动子区域或者调控下游信号轴和基因组位点区域，从而完成完整的调控作用。此外，lncRNA还可以作为一个大的脚手架，用于支撑信号通路，以便更好地控制信号传导，从而实现基因表达的调控。通过将多种蛋白质复合物结合在一起，并将其定位到特定的基因组位点或靶基因启动子区域，可以显著改变基因表达和染色体动力学[25, 26]。多种功能以及众多lncRNA分子配合mRNA、微小RNA（microRNA，miRNA）、蛋白分子等，共同交织成信号网络，在生理或疾病的状态中发挥重要作用。
第3章 材料与方法
3.1 实验材料
3.1.1 临床标本收集 胃癌组织标本及对应的正常组织标本均采集于吉林大学某三甲医院2020年10月--2021年10月就诊的胃癌患者，共计38例。 这些患者满足以下条件：
1）患者可以并接受了手术治疗； 2）术后病理证实为原发性胃癌； 3）术前未行任何治疗； 4）均拥有完备可靠的临床资料； 5）签署知情同意书。
3.1.2 细胞系和过表达载体
苏州吉玛基因公司设计提供用于过表达linc01527的慢病毒载体。商品化人源胃癌细胞系BGC-823、AGS以及HGC-27均来自于Procell公司（武汉，中国）
实验试剂：
3.2 实验方法
3.2.1 RNA相关实验
（1）总RNA提取
1）从肿瘤/正常组织中抽取20mg，并将其放入冰块中进行冷却，然后用DEPC水进行2-3次冲洗，最后将其放入1.5ml的无酶EP管中，以备后续使用；
2）研磨：加入Buffer RL1（600μl；来自RNA提取试剂盒；提前加入无水乙醇1：1备用），使用匀浆器将肿瘤/正常组织研磨均匀，1000rpm离心，留取上清液备用；
3）清除基因组DNA：转移上清液至DNA-Cleaning Column纯化柱（RNA提取试剂盒）中，12000rpm（常温高速离心，下文条件相同），离心2min。转移收集管中的上清至新的无酶EP管中。
4）将Buffer RL2（800μl）加入上清液中，并进行搅拌，使混合物均匀；
5）将混合溶液分两次转移至RNA纯化柱中，每次转移量应尽可能均匀，以保证液体量不超过纯化柱容量，常温高速离心，1min。将废液丢弃，只保留纯化柱。后续实验中使用的纯化柱均为该RNA-Cleaning Column纯化柱，以纯化柱简称；
6）将Buffer RW1加入纯化柱中，常温高速离心，1min，以获得最佳纯化效果。将废液彻底清除，只保留纯化柱；
7）将Buffer RW2（700μl）加入纯化柱，常温高速离心，离心1min。纯化柱留存；
8）如有必要，重复上一步骤；
9）将Buffer RW2从纯化柱中取出，移动到收集管内，常温高速离心，2min；
10）获取RNA溶液：RNA-Free水（65℃；RNA提取试剂盒）预热备用。将纯化柱放置在新的收集管中，在中央区滴入25-40μl预热的RNA-Free水，静置1-2min。该步骤除预热外，是否滴入中心区域也决定了RNA的溶解量；
11）常温高速离心，1min，如提取量过少可酌情重复该步；
12）分光光度计检测RNA的浓度。
第3章 材料与方法 ..................................... 17
3.1 实验材料 .................................. 17
3.1.1 临床标本收集 ............................. 17
3.1.2 细胞系和过表达载体 ......................... 17
第4章 实验结果 .......................................... 30
4.1 Linc01527 在胃癌组织及细胞系中的表达与临床病理资料相关性分析 ............... 30
4.1.1 Linc01527 在胃癌组织和细胞系中的表达情况 .................... 30
4.1.2 Linc01527 表达水平与胃癌患者临床病理特征的相关性分析 ........................... 31
第5章 讨论............................. 38
第5章 讨论
因为我国的自有国情，将胃镜检查作为普筛项目应用于广大群众，尤其是偏远地区的农村人口的设想，仍不现实。同时，生物治疗和免疫治疗等高昂的治疗成本也让广大的罹患胃癌的患者望而却步。因此，发现更加精准的肿瘤标志物，发明更加简便易操作的检查，开发更加低廉可接受的治疗手段，成为一个值得思考的问题。而lncRNA恰恰具有在这些方向上应用的潜力。不仅特征性的lncRNA可以通过外泌体等形式分泌到尿液和血液中被检出，qPCR手段也相对低廉和普及，高分子材料包裹介导[45]等治疗形式也是目前被讨论的热点。因此，不断对非编码RNA尤其是lncRNA进行深入探讨，丰富lncRNA在GC中的机制研究，可能为未来胃癌患者的诊疗提供重要思路。
随着近年来对lncRNA在胃癌中作用的研究不断深入，发现其主要通过信号、诱饵、引导和支架作用，实现：(Ⅰ)与DNA结合蛋白互作，阻断相关信号通路，介导转录水平的变化[1]；(Ⅱ)招募表观修饰酶，介导染色质表观遗传学水平上的改变[2]；(Ⅲ) 下游mRNA稳定剂，延长其半衰期[3]；(Ⅳ)介导基因选择性剪接体表达[4]；(Ⅴ)蛋白质的翻译调控与回路调控[5]等功能，并借此在主要的肿瘤通路上承担角色，在胃癌的发生、发展过程中发挥作用。例如，linc01133可以通过扮演诱饵角色与miR-106a-3p结合介导Wnt/β-catenin通路的表达，促进胃癌的增殖[60]；linc00942通过抑制MSI2的降解增强c-Myc mRNA的稳定性来抑制胃癌细胞凋亡和促进干性表型[100]；SRSF6通过介导PICALM的14跳跃性剪接体，触发S-to-L的异构体转换，从而引起PICALML表达改变，介导胃癌在胃癌化疗中的自噬调节及耐药[102]；作为体腔器官，失巢凋亡是胃癌面临的一道“鬼门关”，SNHG11可以通过Wnt/β-catenin通路介导胃癌的抗失巢凋亡[65]；代谢重编程上，linc00924通过诱导脂肪酸的摄取增加参与胃癌的脂肪酸代谢重编程并促进胃癌腹膜转移[103]；GAS6-AS1抑制E2F1介导的GLUT1转录介导糖酵解的受抑[104]；
第6章 结论
1.长链非编码RNA linc01527在胃癌组织中低表达，但目前的数据不支持与肿瘤患者的临床病理特征相关；
2.长链非编码RNA linc01527抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力；
3.长链非编码RNA linc01527可能通过抑制NF-κB，抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和转移等生物学行为。
参考文献（略）