本文是一篇医学论文，本文揭示了鲁氏菌感染期间，布鲁氏菌分泌蛋白BMCO通过靶向TBK1,抑制NF-κB信号通路活性，降低宿主促炎性细胞因子（IL-1、IL-6、TNF-α）的表达水平，提高布鲁氏菌在胞内的存活数量，为进一步全名认识布鲁氏菌胞内免疫逃逸机制提出了新的观点。
第一章绪论
1.2国内外研究进展
1.2.1布鲁氏菌病原学特性
1.2.1.1形态特性
布鲁氏菌，革兰氏阴性胞内寄生菌，无动力、无芽孢，大小为0.6~1.5μm×0.5~0.7μm，初次分离时多成球状、球杆状或椭圆形，传代培养后逐渐呈现小杆状，菌体无鞭毛且不形成荚膜[5]。涂片检查多见单个、串状、短链状排列，偶见成对排列。可用碱性染料染色，姬姆萨染色为红色，对苯胺染料吸附缓慢，经科兹洛夫斯基或其他相关差异染色方法染色后，可表现出特殊的染色反应[6]。
1.2.1.2培养特性
布鲁氏菌是绝对嗜氧菌，但多种菌株仍需要10%的CO2环境，研究表明，布鲁氏菌的最适培养条件为：PH≈6.6-7.4之间，温度：36-37℃。该菌的培养过程中对培养基要求很高，生长繁殖时需要多种氨基酸（amino acid）、维生素（vitamin）、菸草酸（Tobaccoacid）、生物素（biotin）、泛酸钙（calcium pantothenate）等营养物质[7]。因此，在进行布鲁氏菌扩繁时，通常会向培养基中添加牛或羊的新鲜胎盘或10%兔血清。布鲁氏菌的生长速度非常缓慢，首次分离培养需要10天甚至20-30天，实验室传代的甘油冻存菌株，通常情况下只需要48-72h即可达到对数生长期[8]。
1.2.1.3生化特性
和其他许多革兰氏阴性菌不同，布鲁氏菌对于糖原的分解能力相对较差，通产条件下，只能分解葡萄糖而产生少量的酸性物质，不能产生气体[9]。但是最近又有研究表明，布鲁氏菌的少数其他种属也能分解蔗糖、鼠李糖、麦芽糖。布鲁氏菌不能产生吲哚，不凝固牛乳，不能利用柠檬酸盐，不能从O-硝基酸-B-D-半乳糖苷中释放O-硝基酸，不液化明胶，除羊种布鲁氏菌（Brucella ovis）外，其他种属菌均不能还原硝酸盐[10]。根据其LPS（脂多糖）中O抗原的完整性，可以将布鲁氏菌划分为两类，即粗糙型布鲁氏菌（R型）和光滑型布鲁氏菌（S型）。当布鲁氏菌胞壁的黏肽（mucopeptide）受损时，也会变为胞壁不完整的L型。研究表明，O抗原对布鲁氏菌的早期胞内存活具有重要作用，O抗原的缺失，更容易引起宿主细胞P65因子的入核，诱导巨噬细胞凋亡，降低R型布鲁氏菌的毒力水平[11-12]。根据这一特性，R型布鲁氏菌被广泛的应用于减毒疫苗的生产研发中，其中，布鲁氏菌RB51疫苗株成为最为典型的代表。
第三章TBK1参与布鲁氏菌体外感染宿主细胞诱发的促炎反应
3.1材料与方法
3.1.1试验材料
3.1.1.1细胞及菌株
小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（RAW264.7）、布鲁氏菌2308均由新疆石河子大学动物疾病防控兵团重点实验室保存。
3.1.1.2主要试剂
第五章布鲁氏菌分泌蛋白BMCO通过与TBK1结合抑制宿主先天固有免疫应答
5.1材料与方法
5.1.1试验材料
5.1.1.1细胞、菌株与质粒
小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（RAW264.7）由新疆石河子大学动物疾病防控兵团重点实验室保存。本试验所需菌株和质粒如表5-1所示：
5.2结果
5.2.1融合PCR缺失株载体的构建
利用BMCO上、下游同源臂和卡那霉素抗性基因特异性引物，对BMCO上、下游同源臂和卡那霉素抗性基因进行PCR扩增，扩增结果如图5-1A、5-1B、5-1C所示。通过融合PCR对三段序列进行融合，融合产物以BMCO上游同源臂的上游引物和BMCO下游同源臂的下游引物特异性扩增融合片段，扩增结果如图5-1D所示。对扩增结果进行送至上海生工生物技术工程有限公司进行双向测序，与预期结果相符，表明片段融合扩增成功。
测序无误的融合片段连接于PMD19-T，构建重组载体。重组载体电转至流产型布鲁氏菌S2308，涂布于布鲁氏菌卡那霉素抗性肉汤培养基。挑去阳性菌落，进行传代培养，对第10代阳性菌落进行菌液PCR检测，结果表明，以BMCO为特异性引物，缺失株中不能检测到BMCO基因的特异性条带，BMCO-N-F和BMCO-C-R和Kan基因引物分别检测出现特异性条带大小分别为2115和1054 bp（图5-2），和预期结果相符，说明成功构建可以稳定遗传的BMCO基因缺失株，即S2308ΔBMCO。
第七章论文创新点
1.构建布鲁氏菌分泌蛋白酵母双杂交文库，建立布鲁氏菌分泌蛋白酵母双杂交筛选系统，首次筛选、鉴定、验证了一个与固有免疫中心节点蛋白TBK1存在相互作用的布鲁氏菌分泌蛋白。
2.揭示了鲁氏菌感染期间，布鲁氏菌分泌蛋白BMCO通过靶向TBK1,抑制NF-κB信号通路活性，降低宿主促炎性细胞因子（IL-1、IL-6、TNF-α）的表达水平，提高布鲁氏菌在胞内的存活数量，为进一步全名认识布鲁氏菌胞内免疫逃逸机制提出了新的观点。
参考文献（略）