本文是一篇医学论文，我们的研究表明，Phps对APAP诱导的小鼠急性肝损伤具有保护作用，其主要机制是通过激活AMPK/Nrf2信号通路减轻氧化应激;另一方面，Phps激活自噬通路，减轻肝脏损伤。为保肝药物的研发提供了理论依据。
第一章 急性肝损伤
1.1 急性肝损伤概述
在过去的几十年里，肝病的发病率迅速上升，并成为全球死亡和疾病的主要原因之一[1]。急性肝损伤是由多种因素导致的严重肝脏损伤性疾病，具有较高的死亡率。肝细胞的不同损伤都导致相同的结局，即氨基转移酶快速升高和凝血紊乱[2]。急性肝损伤的临床特征是无慢性肝病的患者转氨酶（作为肝损伤的标志物）突然升高2-3倍，并伴有肝功能受损，即黄疸和凝血功能障碍[3]。
导致肝细胞损伤的物质要么直接引起毒性坏死，要么引起细胞凋亡和免疫损伤。从出现症状到肝性脑病的时间可以区分不同形式的急性肝损伤：直接、非常迅速的损伤(在数小时内)，称为超急性肝损伤；还有一种较慢的、基于免疫的损伤(几天到几周)，称为急性肝损伤。超急性的致病原因主要是扑热息痛毒性和局部贫血，在损伤后6-36小时内可被临床检测到，在3-5天内恢复。相比之下，发展较慢的损伤通常需要7天到24周才能出现临床症状。由乙肝病毒、自身免疫或药物诱导性肝损伤引起的肝损伤发展较缓慢，出现肝损伤迹象需要7天以上，超急性肝损伤的特点是转氨酶浓度非常高，胆红素浓度很低，而急性肝损伤恰恰相反[2]。
1.1.1 急性肝损伤病因
1.1.1.1 药物诱发的肝损伤
药物性肝损伤（DILI）是临床中常见的引起肝损伤的因素，常规药物、非法药物、草药产品或膳食补充剂均可引起肝损伤。它通过遗传和环境风险因素发生在易感个体中，这些因素被认为会改变药物的代谢和排泄，导致一系列细胞事件，包括氧化应激形成，细胞凋亡或坏死等。由此产生的肝损伤可表现为一系列表型，这些表型几乎与所有其他肝脏疾病相似，并且严重程度从无症状到肝功能衰竭不等。尽管最近的研究表明，特定的生物标志物仍然不能在临床实践中常规使用，这使DILI难以诊断，并依赖于对特定情况的高度认识和排除其他肝病的原因[4]。
1.2 Nrf2与肝损伤
1.2.1 Nrf2
核因子红系2（NFE2）相关因子2（Nrf2）是一种转录因子，在结构上与碱性区域亮氨酸拉链（bZip）转录因子亚家族有关。Nrf2由NFE2L2基因编码，并且具有高度保守的区域，与bZip转录因子的其他成员（如c-Jun和c-Fos）不同[43]。Nrf2于1994年首次被鉴定为与人类β珠蛋白基因的NF-E2结合位点结合的蛋白质[44]。仅仅几年后，Itoh等人发现了它作为抗氧化反应元件（ARE）介导的基因表达的调节因子的作用[45]。
在正常状态的细胞中，Nrf2附着在Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)重组蛋白上可以防止从细胞质定位到细胞核中，而泛素连接酶cullin3可以通过泛素化降解Nrf2。因此，在正常条件下，Nrf2的细胞质半衰期仅为20分钟[46]。细胞中的氧化和亲电应激将Nrf2从Keap1中分离出来，游离的Nrf2可以易位到细胞核中并与Maf蛋白结合（MAFF，MAFG，MAFK）[47, 48]。然后，由此产生的异源二聚体将与ARE结合并调节100多个基因的表达，其中一些基因编码参与细胞抗氧化防御系统蛋白的表达。包括：过氧化氢酶（CAT）、血红素加氧酶1（HO-1）、NAD（P）H醌氧化还原酶1（NQO1）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、超氧化物歧化酶（SOD）、磺胺多辛1（SRXN1）、谷胱甘肽S转移酶（GST）、硫氧还蛋白还原酶1（TXNRD 1）、UDP-葡萄糖醛酸基转移酶（UGT）和多药抗性相关蛋白（MRP）。
Nrf2因其在预防退行性和慢性疾病（如阿尔兹海默病，帕金森病，多发性硬化症（MS）和肌萎缩性侧索硬化症（ALS））方面的关键作用而受到广泛关注[49, 50]。研究表明Nrf2敲除（Nrf2 KO）小鼠对二丁基对甲酚（Butylated hydroxytoluene，BHT）诱导的急性肺损伤的敏感性高于正常小鼠，强调了Nrf2对异种生物制剂毒性的重要性[51]。
第二章 桑黄多糖研究进展
2.1 桑黄多糖的药理作用
2.1.1 抗炎作用
炎症是机体自身的一种防御机制，临床表现为红、肿、热、痛和机能障碍。据报道，Phps能显著提高小鼠血清中的IL-2和IL-18的水平。桑黄多糖可以显著抑制胶原诱导性关节炎大鼠NF-κB信号通路的表达，同时降低TNF-α、IL-1β的分泌，并且在细胞中也观察到相同的结果[119-121]。
2.1.2 抗肿瘤作用
根据文献报道，桑黄多糖抑制肿瘤效果明显，是通过促进T、B细胞的产生，激活巨噬细胞和自然杀伤细胞来抑制肿瘤的生长和转移[122]。Li等的研究表明桑黄多糖对小鼠肉瘤细胞S180和肝癌细胞H22有显著的抑制作用，可以延长小鼠的生命周期[123]。桑黄多糖还可影响变肿瘤细胞周期，从而引起肿瘤细胞凋亡，可以下调HepG2细胞中Ca M、Ca MKⅡ、EGF、EGFR、K-ras和c-fos基因的表达水平，提高了细胞内Ca2+浓度，说明其可能诱导HepG2细胞S周（DNA合成期）阻滞从而抑制HepG2细胞增殖[124]。
2.1.3 抗氧化作用
自由基产生过多或者消除过慢会引起机体损伤，从而导致各种疾病和加速衰老。越来越多的证据表明抗氧化可以延缓衰老。闫景坤的实验表明桑黄多糖能清除细胞内羟基自由基（OH）和超氧自由基（O2-）等[125]。此外，桑黄多糖还可以保护线粒体DNA免受活性氧造成的损伤，维持线粒体正常功能[126]。
2.2 小结
桑黄多糖具有易获得和其价格低廉的优势且有多种生物活性，包括抗炎、抗氧化和抗肿瘤等。在许多疾病中发挥重作用，然而在APAP诱导的急性肝损伤中的作用研究较少。因此，本实验通过建立由对乙酰氨基酚（APAP）诱导的小鼠急性肝损伤模型，来探究桑黄多糖对小鼠急性肝损伤的作用及机制。
第三章 桑黄多糖对小鼠急性肝损伤的作用机制 .............................. 30
3.1 材料 .................................. 30
3.2 实验方法................................ 31
3.3 结果 ..................................... 31
3.4 讨论 ................................ 36
3.5 小结 .............................. 37
结论 ............................. 38
第三章 桑黄多糖对小鼠急性肝损伤的作用机制
3.3 结果
3.3.1 Phps对APAP诱导的急性肝损伤中AMPK通路的影响
AMPK在能量和炎症反应中发挥关键作用，并影响Nrf2的核转录水平。因此，我们检测了AMPK通路的蛋白表达。如图3.1所示，Phps显著提高AMPKβ、AKT、AMPKα和ACC的磷酸化水平。这些结果表明，Phps可以促进AMPK通路。
结论
综上所述，我们的研究表明，Phps对APAP诱导的小鼠急性肝损伤具有保护作用，其主要机制是通过激活AMPK/Nrf2信号通路减轻氧化应激;另一方面，Phps激活自噬通路，减轻肝脏损伤。为保肝药物的研发提供了理论依据。
参考文献（略）