1.变异与外植体的关系红掌组培一般选择叶片或叶柄为外植体,茎尖因较难消毒且容易伤及母株影响其正常生长通常不予以采用。红掌不同品种或同一品种的不同部位作为外植体在相同的培养条件下诱导愈伤组织的效果不同。同一品种的叶片和叶柄的诱导难易程度及同一类外植体因部位不同和成熟度不同也有区别。通常难以诱导出愈伤组织的部位因细胞在分裂过程中发生剧烈变化而更容易引发变异产生。笔者生产研究发现,切花品种“热情”,叶柄比叶片更易于诱导愈伤组织,盆栽品种“阿拉巴马”叶片则比叶柄更容易诱导愈伤组织;其次是应根据不同的品种寻找不同的诱导配方,并根据不同的部位寻代写教师职称论文多少钱找易于诱导出愈伤组织的外植体进行生产,如品种“米多蕊”初代诱导以激素6-BA 1.5mg/L配合KT 1.0mg/L与2,4-D 0.1mg/L容易诱导出愈伤组织,增殖时则以低浓度的6代写教师职称论文-BA 0.5mg/L配合KT 0.5mg/L与NAA 0.1mg/L可获得较高的增值率和转化率[10];品种“阿拉巴马”初代诱导和增殖则均以6-BA 0.5~2.0mg/L与NAA 0.2~0.5mg/L相配合就可以获得较高的诱导率和增殖与转化率。另外,在采集外植体时要注意,红掌每片叶的基部都有一个叶原基和一个花原基,即通常讲的“一花一叶”,因此,采集外植体时应该剪切距离新叶柄基部4.0cm以上的位置,保留其母株新叶萌发能力,保证母株的正常生长及提供下一批外植体的采集工作。
2.变异与初代培养的关系外植体初始培养阶段的培养条件是引起变异的一个不可忽视的重要因素,是红掌组培过程中变异发生的源头,做好以下各项工作有利于防控变异发生。建立好母本园通过植物学形态鉴定和分子检测等措施挑教师职称论文发表选品种纯正,生长处于旺盛期的健壮、无病虫害的优良株系作为采种母株,对来源不明,生长状况可疑的植株要坚决淘汰。初代培养方案的确立首先研究有关红掌组织培养及相关近属种组培方面的文献资料,掌握国内外对红掌组培的研究状况。由于商业利益的关系,一般报道都没有明确标明试验过程某些关键信息或某些细节,只能根据所有的研究报道资料进行总结,确定试验研究的方向,再结合实践经验设计多梯度多因素多重复的外植体处理与诱导组合。通过小规模论证实践结果,确定采集外植体的方法、外植体消毒灭菌的方法、初代诱导培养基及培养条件等生产方案。因红掌采用叶片和叶柄进行诱导生产,且技术上有一定的难度,特别是在照搬资料上的方法并不能得到良教师职称论文格式范文好结果的情况下,很多人急于求成,在激素的使用上随意加大使用浓度和增多激素组合数量,给变异苗的发生加大了机会,甚至初代培养所获得的愈伤组织就发生了严重的变异,徒劳无获。如果未能及时发现并剔除,变异苗数量将呈几何级数量增长,其人力物力方面的浪费不可估量。所以,在进行红掌组培过程中对外植体的处理、激素的使用、诱导培养的光照与温度条件等一定要进行多梯度选择,激素组合最好不要超过3种以上,以筛选出最佳的低浓度组合和最适宜的培养条件,为生产优质红掌组培苗打下优良的基础。
3.变异与继代培养的关系继代过程是组培苗大量繁殖的过程,也是产生变异苗的主要阶段。为了降低组培苗的变异率,应做好以下几个方面的防控措施。继代培养代数一般来讲,随着继代数量的增多,组培苗的变异率往往会随之增加。所以,在培养过程中,增殖培养尽量不要超过8代以上,培养时间不要超过2a。对需增殖8代以上的种苗时要进行小规模试验,再经过多代增殖观察及组培苗DNA片段分析变异率后再调整生产计划,以达到控制变异的目的。当然,最好应根据生产需要,及时进行采种更新,减少变异苗的发生。继代的间隔时间由于组织培养中每袋/瓶中所装的培养基不多,提供给外植体的生长时间有限,如果较长时间不转接,小苗的生长就会处于营养不良的状态,且时间越久,越容易因营养不良导致组培苗变异发生,所以及时继代转接非常重要。一般一袋/瓶50mL的培养基(添加有机复合物后),愈伤组织应在30d左右转接为佳,接种小苗在70d左右内转接为佳。接种员工的培训在继代过程中,接种工是全程接触组培苗的人员,及时剔除变异苗基本上要靠她们进行。所以接种工人对变异苗的辨认培训至关重要,是对减少变异苗最有效的途径之一。培训接种员工首先要让她们正确认识正常的愈伤组织和小苗的形态,正常形态以外的继代苗都应该作为变异苗进行暂处理。对于可疑部分可做进一步的DNA检测,如果是变异苗应进行淘汰处理,如果是因为管理过程中环境控制不当,如光照不足或高温等情况使愈伤组织分化小苗较密而又没有及时转接时引起的徒长及一些形态上的微小变化,则应该保留下来,并进行管理上的调整,使其恢复正常生长。所有小苗均来自初代诱导的愈伤组织,首先剔除不健康的愈伤组织对减少变异非常重要。正常的愈伤组织质地紧密,颜色为绿色,表面的颗粒形状均匀,而生长不良的愈伤组织通常为颜色偏黄或过于浓绿,质地松散或过于紧密,表面的颗粒形状过细小或无,不利于分化小苗;红掌变异小苗主要类型有:
(1)新叶比老叶的叶面积变小;
(2)叶片形状发生改变;
(3)单株小苗不断分化丛生芽,新萌发的侧芽与老芽高度相近;
(4)同一植株叶片丛生,没有萌发新侧芽;
(5)小苗基部较粗大,尾端叶片的叶柄和叶面积逐渐变短和变小,形成大头尖尾的形状等等。只有正确认识了变异的类型,才能更及时有效的剔除变异,避免不必要的浪费。